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禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)能感染几乎所有的野生及饲养禽类，引起禽类尤其是饲养禽类的死亡，AIV的流行给养禽业造成了严重的经济损失。1997年在香港发现H5N1亚型禽流感病毒突破生物屏障直接感染人，使人们认识到AIV对于人类公共卫生的重要性。疫苗接种是预防和控制AIV流行的主要措施之一，但AIV突变频率高、亚型多，给疫苗的研制带来困难。AIV的M2蛋白是病毒囊膜上的蛋白之一，具有亚型间高度的保守性，是理想的交叉保护性疫苗的候选抗原。AIV主要是经过动物呼吸道等粘膜系统传染，具有诱导机体粘膜和系统应答能力的疫苗对于禽流感的防治具有重要的意义。大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin，LT)是目前研究较多的粘膜佐剂之一，尤其是其B亚单位不具有LT的肠毒素毒性，但仍然保持较好的粘膜佐剂活性。本研究基于M2基因及其M2e表位与大分子载体HBcAg(Heptitis B core antigen，HBcAg)构建融合基因，利用融合基因制备多肽和DNA疫苗，并对疫苗免疫效果进行了研究，同时研究了LTB亚基对多肽和DNA疫苗的佐剂效应。主要结果如下：1)利用RT-PCR从一株福建分离的AIV H5N1病毒株中克隆了其M基因，序列比对结果表明与人源分离株遗传距离较远，从M基因上扩增得到完整的M2基因，利用OE-PCR(Overlap extension PCR)得到缺失跨膜区的△M2，将△M2进行原核表达。利用OE-PCR分别将M2e表位融合到大分子载体HBcAg的N端和主要免疫优势区(Maior immunodominant region，MIR)，构建融合基因M2eHBc和M2eHBc+，进行了原核表达。上述原核表达蛋白具有抗原性、亚型间交叉识别能力、M2eHBc和M2eHBc+还具有体外自主包装成VLP(Virus-like particles，VLP)颗粒的能力，肌肉注射免疫小鼠后均能诱导小鼠产生M2特异性抗体，其中M2eHBc+蛋白免疫效果显著优于其它免疫组；2)从大肠杆菌195毒株中克隆出LT基因，并对其B亚基进行了原核表达，表达的重组LTB蛋白具有抗原性和体外GM1结合活性。将LTB基因与M2eHBc+融合进行了原核表达，表达出的LBM2eHBc+蛋白能与M2蛋白抗体发生免疫识别，能自主包装成VLP颗粒，具有体外GM1结合活性；3)动物免疫试验表明，与阴性对照比M2eHBc+蛋白通过粘膜途径免疫小鼠能诱导一定的系统和粘膜应答，表达的LTB蛋白与M2eHBc+蛋白混合通过粘膜途径免疫小鼠能显著增强机体的血清IgG应答，诱导较强的粘膜IgA应答，表明所表达的LTB蛋白具有很强的粘膜佐剂活性。表达的LBM2eHBc+融合蛋白通过粘膜途径免疫小鼠引起的机体免疫系统应答水平与M2eHBc+混合LTB免疫组相似，且对粘膜IgA的诱导能力优于混合组；4)将M2eHBc+与pCDNA3载体连接构建pCDNA3-M2eHBc+DNA疫苗，转染293细胞，能表达出抗原蛋白且该蛋白具有抗原性，DNA疫苗肌肉注射免疫小鼠后能诱导机体产生较强的抗原特异性抗体和T细胞增殖应答；5)LTB质粒与pCDNA3-M2eHBc+DNA疫苗等量混合，或LTB基因与pCDNA3-M2eHBc+融合构建的DNA疫苗肌肉注射免疫小鼠，与单独pCDNA3-M2eHBc+DNA疫苗肌肉注射组比，能显著增强DNA疫苗的细胞免疫应答，对体液IgG应答的佐剂效应不明显；通过滴鼻途径免疫时能显著刺激机体粘膜IgA分泌；6)研究了DNA疫苗和蛋白疫苗的初免／加强策略，结果表明在DNA疫苗两次免疫后用一次相同抗原的蛋白疫苗加强免疫，可以显著增强机体系统IgG应答，且对DNA疫苗诱导的T细胞应答影响不显著；7)将LBM2eHBc+融合基因构建酵母表达载体pPIC9K-LBM2eHBc+，转化GS115表达菌，筛选出能分泌表达LBM2eHBc+蛋白的转基因酵母株，WesternBlotting分析该蛋白具有抗原性。