论文部分内容阅读
目的:通过解毒益智方作用于阿尔茨海默病转基因线虫的研究,观察线虫的存活率,瘫痪率及相关基因表达量的变化,以明探讨解毒益智方对线虫神经损伤的作用机制。为药物进入临床提供实验依据。方法:实验所用的解毒益智方进行水提取制成冻干粉以备用,实验选用转基因Aβ1-42型CL4176秀丽隐杆线虫作为实验动物模型,经同期化处理随机分为模型组(0mg/L)、低剂量药物组(25 mg/L)、中剂量药物组(50 mg/L)、高剂量药物组(100mg/L)。寿命实验每组50条线虫,每24小时对线虫死亡数量进行计数,根据线虫非死亡数量绘制图表,并对四组线虫进行平均寿命、最大寿命进行分析。Aβ引起神经损伤实验测定(瘫痪率实验)每组30条线虫,每2小时进行观察线虫瘫痪及死亡数量,根据线虫非瘫痪数量绘制图表,进行数据分析。选取模型组与中剂量组线虫,每组100条,将同期化的线虫在16℃培养48h后转移至25℃进行诱导,诱导48h后,分别提取线虫体内的总mRNA,之后进行反转录合成cDNA,最后进行实时荧光定量PCR来检测TNFAIP1 homolog(F22E5.6、ZC239.12),HSP16.2(Y46H3A.D),HSP16.41(Y46H3A.E)基因表达量的变化。结果:1.其中寿命实验中,各剂量药物组较模型组平均寿命分别延长30.8%,22.05%,64.70%,平均延长39.22%。2.平均寿命延长,但线虫存活率并不随着药物浓度升高而升高。3.寿命实验中药物组比模型组数据统计结果,P值小于0.05,实验具有统计学差异,且中剂量组(50 mg/L)比模型组数据P值小于0.01。4.Aβ引起神经损伤实验测定(瘫痪率实验),各剂量药物组与模型组比较,P值小于0.05,存在统计学差异。5.低剂量药物组(25 mg/L)线虫各段时间非瘫痪率均高于模型组线虫非瘫痪率,其中76h时二组线虫非瘫痪率差别最大,低剂量药物组为63.33%,模型组为40%。6.相较于模型组,中剂量组药物增加TNFAIP1 homolog(F22E5.6、ZC239.12),HSP16.2(Y46H3A.D),HSP16.41(Y46H3A.E)等基因表达量。结论:1.解毒益智方能够延长线虫寿命的同时降低瘫痪率,且与药物浓度不存在相关性。2.低剂量解毒益智方比中、高剂量解毒益智方对线虫神经损伤保护作用效果好。3.解毒益智方通过提高TNFAIP1 homolog(F22E5.6、ZC239.12),HSP16.2(Y46H3A.D),HSP16.41(Y46H3A.E)等基因的转录,使神经保护基因高表达。