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经导管动脉栓塞术(TAE)通过阻断滋养动脉导致肿瘤或器官缺血坏死而达到治疗目的。然而TAE后组织急性缺血坏死,易引起一系列与非特异性炎症和组织坏死相关的症状,包括上腹部疼痛、胃肠反应、发热,即栓塞后综合征(PES)。其中,疼痛是PES中最难以忍受的症状,会降低患者生活质量,导致愈后不良,因此需要予以及时正确的临床管理。围介入期,经导管动脉输注利多卡因可通过阻断钠离子通道、刺激抗炎因子生成以及抑制促炎因子释放等,从而在一定程度预防PES的发生。但是,利多卡因半衰期短,易受血流冲刷和稀释作用使局部药物浓度不足,从而导致预防效果不佳。通过“油包水”乳化技术可延长利多卡因作用时间,但经乳化后的碘油微粒释药性能不稳定,会增加全身药物毒性的风险。如何实现延长利多卡因作用的同时,保证利多卡因释药的稳定性,药物载体的选择尤为重要。本研究通过理化表征分析探究CalliSpheres(?)负载利多卡因(CB/Lid-n,n=0、5和10)的方式,并探讨CB/Lid-n的载药、释药效率;通过体外实验评价CB/Lid-n的生物相容性和抗炎效果;通过构建动物模型探究CB/Lid-n镇痛、抗炎以及预防PES的效果。第一部分 CalliSpheres(?)载利多卡因微球的理化表征、生物相容性及体外抗炎特性的探讨目的探讨CalliSpheres(?)载利多卡因(CB/Lid-n)的理化表征、生物相容性及体外抗炎特性。方法1.通过红外光谱(FT-IR)、拉曼光谱(Raman)、能谱分析(EDS)及扫描电子显微镜(SEM)对CB/Lid-n的理化性能进行探讨,分析CalliSpheres(?)负载利多卡因的方式;使用紫外分光光度法检测CB/Lid-n的包封率、载药率以及累积释药率。2.体外使用溶血率实验检测CB/Lid-n的血液相容性;通过活/死细胞实验和细胞毒性实验(CCK8)检测CB/Lid-n对小鼠成纤维细胞(L929)细胞活力的影响。3.构建体外细胞炎症模型,检测CB/Lid-n对IL-6和IL-10表达的影响。结果1.FT-IR、Raman和EDS结果显示CalliSpheres(?)通过与利多卡因的N-H形成H键实现药物负载;SEM结果显示,载利多卡因后CB/Lid-5和CB/Lid-10的径向比分别为 1.21±0.06、1.30±0.08。2.CB/Lid-5载药10分钟后包封率达最大值为84.03±0.29%,CB/Lid-10载药5分钟后包封率达到的最大值为98.79±0.32%;CB/Lid-5和CB/Lid-10于载药后10分钟、5分钟达最大载药率,分别为28.01±0.10%和49.40±0.16%;CB/Lid-n累积释药曲线平缓,CB/Lid-5和CB/Lid-10前30分钟内释药率分别为29.86 ±2.89%、38.34±3.36%,12小时后释放率均大于90%。3.;CB/Lid-n对细胞活力有一定影响,但各组各时间点细胞相对活力均大于90%。CB/Lid-0、CB/Lid-5 和CB/Lid-10 溶血率分别为 0.5±0.2%、0.4±0.3%和0.4±0.1%。4.体外细胞验证模型实验中,与CB/Lid-0相比,CB/Lid-5和CB/Lid-10抑制IL-6表达并促进IL-10表达,均有显著差异(p<0.05),其中CB/Lid-10效果最显著。结论CalliSpheres(?)通过与利多卡因间形成H键实现药物快速负载和解离。CB/Lid-n生物相容性良好,通过释放利多卡因抑制IL-6和促进IL-10的表达,实现体外抗炎效果。第二部分 CalliSpheres(?)载利多卡因微球镇痛、抗炎以及预防PES的动物实验研究目的通过构建小鼠足痛模型和兔VX2肿瘤模型评价CB/Lid-n镇痛、抗炎以及预防PES的效果。方法1.对24只BALB/c小鼠构建足痛模型后随机分为4组:Control组、CB/Lid-0组、CB/Lid-5组和CB/Lid-10组。通过热缩足反射潜伏期(TWL)测试检测CB/Lid-n对小鼠热痛阈的影响;记录72小时内足跖厚度,以及通对足跖H&E和Masson染色,通过计算肿胀比、真皮厚度以及胶原沉积率评价CB/Lid-n的抗炎效果;通过免疫组化通检测组织Nav 1.7、IL-6以及IL-10的表达,探讨CB/Lid-n镇痛、抗炎的作用机制。2.将27只VX2肿瘤模型实验兔随机分为3组进行TAE:假TAE组(Control组)、CB/Lid-0组和CB/Lid-10组。通过Ki-67-Tunel免疫荧光双染评价各组肿瘤增殖和凋亡水平;通过液相质谱检测TAE后30 min内肝动脉血中利多卡因浓度,以及TAE后第1天和第3天组织内利多卡因含量;通过观察实验兔TAE后行为学变化,对疼痛程度进行量化;通过免疫组化检测组织Nav 1.7、TNF-α、IL-6以及IL-10的表达,探讨CB/Lid-n预防PES的作用机制。结果1.TWL结果显示,与Control组和CB/Lid-0 相比,CB/Lid-5 组和CB/Lid-10 组小鼠热痛阈显著提高,CB/Lid-10组最明显(p<0.05)。2.与CB/Lid-0组相比,CB/Lid-5组和CB/Lid-10组炎细胞浸润程度低,足跖肿胀比、真皮厚度以及胶原沉积率均显著降低(p<0.05)。3.免疫组化结果显示,与Control组和CB/Lid-0相比,CB/Lid-5组和CB/Lid-10组Nav 1.7和IL-6表达显著降低,IL-10的表达显著增加,其中CB/Lid-10组最明显(p<0.05)。4.27只实验兔均造模成功并完成TAE,成功率均达100%。通过Ki-67-Tunel免疫荧光双染发现,与Control组和CB/Lid-0组相比,CB/Lid-10组Ki-67表达显著降低、肿瘤凋亡指数明显增加(p<0.05)。5.TAE后30 min内,肝动脉血中利多卡因浓度低于其毒性浓度;TAE后第1天和第3天,肝组织内均检测出利多卡因,浓度分别为0.57±0.14 μg/g、0.32±0.07 μg/g。6.TAE后通过对实验兔行为学观察发现,与CB/Lid-0组相比,CB/Lid-10组实验兔表现出的疼痛程度显著较轻。7.TAE后第1天和第3天,与Control组相比,CB/Lid-0组和CB/Lid-10组Nav 1.7、TNF-α以及IL-6 表达显著增加(p<0.05);与CB/Lid-0 组相比,CB/Lid-10组Nav 1.7、TNF-α以及IL-6表达显著减少(p<0.05)。而TAE后第1天和第3天,与Control组和CB/Lid-0组相比,CB/Lid-10组IL-10表达显著增加(p<0.05)。结论CB/Lid-10应用于TAE是安全的,通过缓释利多卡因维持局部药物浓度,通过抑制Nav1.7表达提高疼痛阈,以及调节局部组织炎症微环境,达到镇痛、抗炎以及预防PES的效果,同时促进肿瘤坏死。