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随着肿瘤分子免疫学与分子生物学研究的进展，治疗性肿瘤疫苗的研究成为肿瘤治疗研究的主要发展方向。以往的研究已证明细胞毒性T细胞(Cytotoxic T lymphocyte，CTL)介导的特异性细胞免疫是主要的抗肿瘤机制。细胞毒性T细胞(CTL)可以特异性识别存在于肿瘤细胞表面的抗原多肽，当肿瘤抗原在抗原呈递细胞APC(antigen prescenting cell)的作用下以MHC-肽复合物的形式提呈于APC表面被CTL识别，随后CTL被分化增殖为具有杀瘤活性的细胞，从而特异的杀伤肿瘤细胞。因此寻求特异肿瘤抗原的CTL表位并研制相关的多肽疫苗有效激发体内CTL效应成为肿瘤治疗研究的关键。肿瘤治疗性疫苗研究依赖于,能有效诱导机体免疫系统产生特异CTL杀伤效应的肿瘤抗原及其相应CTL表位的鉴定。MAGE-2是Boon于1989年分离的特异性肿瘤抗原。MAGE-2表达于多种肿瘤组织，但在正常组织除了睾丸和胎盘外其它组织均无表达。MAGE-2分离至今，虽然已经发现了两个CTL表位，并能有效激起转基因小鼠体内CTL效应，但是否能够有效杀伤人类的肿瘤细胞并没有直接证据。在本文中，我们使用超基序与量化基序结合对肿瘤抗原MAGE-2进行重新预测。结果发现9个HLA-A2限制的CTL表位MAGE-248-56(VTLGEVPAA),MAGE-2108-116(AISRKMVE L),MAGE-2112-120(KMVELVHFL),MAGE-2153-161(KASEYLQLV),MAGE-2171-179(PISHLYILV),MAGE-2176-184(YILVTCLGL),MAGE-2220-228(KIWEELSML), MAGE-2237-245(SVFAHPRKL), MAGE-2271-279 (FLWGPRALI)。选择其中四个具有较高研究价值的CTL表位，MAGE-2112-120, MAGE-2171-179, MAGE-2220-228, MAGE-2271-279，做进一步的分子模拟研究和CTL效应研究。计算机模拟显示四个表位肽都能与HLA-A2分子结合，锚点残基的距离均<WP=9>在15-20埃之间，各候选肽具有相似的非键能、氢键数，符合HLA-A2限制性CTL表位的要求。在四个候选表位肽中，MAGE-2112-120是1997年Visseren已鉴定的HLA-A2限制的CTL表位。进一步对四个候选肽进行合成，合成方法均采用标准的Fmoc方案在多肽合成仪ABI431A型上进行。多肽-树脂复合物的切割采用三氟乙酸(TFA)，纯度分析采用反相高压液相(RP-HPLC)，液相色谱/质谱联用(LC/MS)测定合成肽的分子量。结果显示合成肽的纯度均在90%以上，且鉴定出合成肽均为目标肽。进一步验证预测表位是否为CTL表位，进行体外诱导CTL效应实验研究，实验采用标准的51Cr释放实验。以候选表位肽刺激HLA-A2+健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells PBMCs)为效应细胞，同时表达MAGE-2和HLA-A2的人体黑色素瘤细胞LB373-MEL为靶细胞。效:靶为100:1时，MAGE-2112-120刺激效应细胞对靶细胞的溶破率为71.2%，MAGE-2220-228的溶破率为74.4%，MAGE-2271-279的溶破率为68.2%，而MAGE-2171-179则并没有明显的溶破率。候选肽作进一步的亲和力实验，通过多肽与T2细胞的结合情况来进行验证，流式细胞仪进行检测，结果以荧光系数florescence index(FI)作为衡量指标。结果显示MAGE-2112-120的荧光系数为0.79，MAGE-2220-228的荧光系数为0.61，MAGE-2271-279的荧光系数为0.24。通过上述实验可证明MAGE-2220-228和MAGE-2271-279均为MAGE-2的新的CTL表位，且MAGE-2220-228与HLA-A2分子具有高的亲和力。为了提高线性短肽的免疫学效应，我们对CTL表位肽MAGE-2220-228进行分子修饰，构建多能抗原肽MAP(Multiple antigen peptide)。MAP以分子量小且免疫原性弱的赖氨酸为核心，构建4分枝的MAP。分枝肽的合成采用Fmoc-MAP-Branch-PSC分枝肽树脂，标准的Fmoc方案，多肽合成仪ABI431A型进行分枝肽合成。纯度分析在RP-HPLC上进行，纯度为72.15%。液相色谱/质谱联用(LC/MS)测定合成肽的分子量，鉴定合成肽为目标肽。CTL效应研究仍采用标准的51Cr释放实验，实验方法如前所述。结果显示4-分枝肽可以诱导较高的CTL效应。当浓度为5μg时4-分枝肽<WP=10>诱导的CTL效应对靶细胞的溶破率为46.1%，而线性短肽仅为9.1%。本实验鉴定出两个新的MAGE-2 HLA-A2限制的CTL表位，MAGE-2220-228，MAGE-2271-279。4分枝肽的构建可有效的提高CTL效应，本实验的研究发现均可运用于肿瘤疫苗的设计。