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本文选用人体药物代谢酶CYP2C9代谢的4种药物,分3步建立具有药物代谢酶CYP2C9活性的微生物模型。首先考察了7株真菌对CYP2C9特异性底物甲苯磺丁脲的转化能力,确认小克银汉霉对其转化能力很强且位点专一,与人体中该特异性底物代谢的产物种类和比例一致,由此初步建立了具有药物代谢酶CYP2C9活性的微生物模型。然后以CYP2C9代谢的3种药物为底物,进一步验证初选模型菌株对它们转化的能力与特点,并与人体相关药物代谢结果比较,确认初选模型具有一定的应用广泛性。鉴于短刺小克银汉霉AS 3.910的综合优势,确立其为最佳具有CYP2C9活性的微生物模型菌株。最后利用人体CYP2C9的化学抑制剂对该模型菌株转化特异性底物甲苯磺丁脲的反应做相关抑制实验,从细胞水平验证短刺小克银汉霉AS 3.910具有与CYP2C9活性相似的药物代谢酶,是研究人体CYP2C9药物代谢适宜的体外模型。 一、初步建立CYP2C9活性的微生物模型 甲苯磺丁脲是人体CYP2C9的特异性底物,选用7种丝状真菌为转化菌株,利用高效液相色谱法对转化产物进行定量分析。结果表明,静息细胞与非静息细胞状态的短刺小克银汉霉AS 3.910、AS 3.153和雅致小克银汉霉AS 3.2028对不同浓度的甲苯磺丁脲均有很强的转化能力,形成92%左右的人体CYP2C9特定产物4′-羟基甲苯磺丁脲,证明小克银汉菌属中的3株菌AS 3.910、AS 3.153和AS 3.2028具有与人体CYP2C9活性相似的药物代谢酶,初步建立了具有药物代谢酶CYP2C9活性的微生物模型。鉴于短刺小克银汉霉AS 3.910的综合优势,选其为放大实验的模型菌株,制备出6.5 g 4′-羟基甲苯磺丁脲纯品,纯度大于99%,利用核磁共振方法进一步确证了其化学结构为人体CYP2C9代谢的特定产物4′-羟基甲苯磺丁脲。 二、验证初选具有CYP2C9活性的微生物模型的适用性 以短刺小克银汉霉AS 3.910、AS 3.153和雅致小克银汉霉AS 3.2028为模型