论文部分内容阅读
近年来糖尿病心肌病（DCM）逐渐受到重视,临床和动物实验已经证实其明确存在,认为它是与大血管及冠状动脉病变无关的心肌病变,与糖尿病患者高心力衰竭发病率和死亡率密切相关。临床研究表明,糖尿病心肌病通常以左心室肥厚和舒张功能减退为早期表现,Poirier等发现血糖控制良好、没有明显慢性并发症的2型糖尿病患者60%存在左室舒张功能缺陷。临床约有10%～30%的糖尿病患者发生心衰。DCM主要病理改变包括心肌细胞增生、肥大,细胞外基质（ECM）积聚、纤维化。DCM发病机制迄今尚未完全阐明,目前研究表明,促进心肌纤维化的炎性、细胞因子异常表达参与其发病,影响心肌细胞舒缩性和心肌间质重构。具体的情况及其分子机制仍不明确,有待深入研究。目的:建立STZ诱导糖尿病大鼠动物模型,观察糖尿病心肌组织中结缔组织生长因子（CTGF）表达异常对心肌间质纤维化、左室肥厚及心功能的影响;同时探讨缬沙坦、氟伐他汀及两药联合应用对糖尿病心肌病的保护作用及可能机制,为临床用药提供实验依据。方法:雄性SD大鼠尾静脉注射STZ致糖尿病模型,成模后随机分为:糖尿病模型组（DM）、缬沙坦组(30mg·kg-1·d-1)、氟伐他汀组(4mg·kg-1·d-1)、缬沙坦联合氟伐他汀组及正常对照组共5组,每组8只。干预治疗12周后采血测空腹血糖、血脂、糖化血红蛋白。用导管法测定血流动力学参数:左室收缩压（LVSP）、左室舒张末压（LVEDP）、左室内压最大上升速率（+dp/dt max）和下降速率（-dp/dtmax）。血流动力学监测完毕后,从主动脉根部水平离断心脏,用冷生理盐水充分冲洗后,滤纸吸干,称重。计算心脏相对重量百分比（全心重/体重*100%）。对各组进行HE、PAS、Van-Gieson染色。观察糖尿病大鼠心脏组织的病理改变。利用Van-Gieson染色,图像分析左室心肌胶原含量;半定量RT-PCR方法检测大鼠心肌组织结缔组织生长因子（CTGF）基因表达情况;应用Western blot技术检测心肌组织Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、转化生长因子-β1、CTGF蛋白表达的变化。结果:1、各组大鼠一般状况和体重、心/体比率及生化指标的变化:糖尿病SD大鼠表现为明显代谢紊乱,体重明显低于正常对照组,心/体比率明显增加37%（P＜0.01）。治疗后,缬沙坦组心/体比率下降10%,氟伐他汀组下降8%,联合治疗组效果更佳,下降13%（P＜0.01）;糖尿病大鼠空腹血糖和糖化血红蛋白（HbA1c）水平明显高于正常对照组,但各个治疗组无统计学差别。糖尿病组大鼠血TG、TC、LDL-C均较正常对照组明显升高（P＜0.01）。与糖尿病组比较,氟伐他汀组和联合治疗组TC、LDL-C均有下降,有显著性差异（P＜0.01）。2、与正常对照组比较,DM组血流动力学指标LVSP、±dp/dt max均降低,LVEDP明显升高（p＜0.05）;三个治疗组血流动力学指标较DM组均有改善（P＜0.05）;联合治疗组LVSP、±dp/dt max明显升高,优于单药治疗组（P＜0.05）。3、VG染色图像分析胶原纤维阳性面积测定的结果显示:糖尿病组大鼠心肌组织胶原纤维染成红色,心肌细胞间充满大量胶原纤维,分布散乱相互连成网状,血管周围聚集较多,与正常对照组相比,胶原纤维阳性面积明显增加,为正常对照组的2.1倍（P＜0.05）。两单药治疗组心肌组织胶原纤维面积均有所降低（P＜0.05）,但仍高于正常对照组（P＜0.05）,联合治疗组心肌胶原纤维面积明显降低,与正常组无统计学意义。4、干预治疗对糖尿病大鼠心肌CTGFmRNA表达的影响:与正常组比较,糖尿病组大鼠心肌CTGFmRNA表达增加,为正常对照组的1.7倍（P＜0.05）,氟伐他汀和缬沙坦治疗组CTGFmRNA表达分别下降20%,28%（P＜0.05）,联合治疗组下降35%（P＜0.05）。5、Western blot印迹检测结果:糖尿病组大鼠心肌组织TGF-β1、CTGF蛋白表达较正常对照组明显增加,作为ECM的主要成分胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白Ⅲ表达明显增加（P＜0.01）;各个治疗组胶原蛋白表达均有所下降（P＜0.05）,联合治疗组优于单独治疗组。结论:1、CTGFmRNA和TGF-β1过度表达,参与了糖尿病大鼠心肌纤维化的过程,导致左室舒张功能的异常。2、缬沙坦和氟伐他汀均能够抑制CTGF及TGF-β1的表达,使得Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原合成明显减少,抑制心肌纤维化,从而改善心功能。两药联合治疗对糖尿病心肌组织起到协同保护作用。