前言:胃癌是一种常见的上皮源性恶性肿瘤,严重威胁人民的身体健康,目前仍然是我国死亡率最高的恶性肿瘤之一。胃癌的发生发展是与遗传因素、环境因素等多因素多步骤相关的过程,在这个过程中可能涉及到多个癌基因的激活与抑癌基因的失活,但其分子发病机制仍不十分清楚。分子遗传学研究表明,多数实体肿瘤存在3号染色体短臂等位基因缺失,提示3p区域可能隐含肿瘤抑制基因。3p缺失在胃癌中也是常见事件之一。RASSF1A基因位于3p21.3,是最近确定的一种候选抑癌基因,它在多人类恶性肿瘤中存在缺失;敲除RASSF1A基因可导致动物模型中胃肠道肿瘤、肺癌、乳腺癌和淋巴瘤的发生。因此RASSF1A是人类肿瘤发生中非常重要的候选抑癌基因。但目前对于RASSF1A是否抑制胃癌细胞的生长及其机制国内外尚未见报道。目的:探讨RASSF1A基因对胃癌细胞SGC7901生长的影响及其可能的作用机制。方法:将RASSF1A基因转染胃癌细胞株SGC7901,WesternBlotting和RT-PCR筛选RASSF1A高表达克隆。MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术分析细胞周期和凋亡率的变化,平板克隆形成试验分析细胞的增殖能力,裸鼠成瘤试验分析其致瘤性,观察RASSF1A基因对胃癌细胞株SGC7901生长的影响。应用EMSA观察RASSF1A对SGC7901细胞NF-κB、AP-1 DNA结合活性的影响,Western blot和免疫细胞化学技术观察RASSF1A对SGC7901细胞c-Fos、c-Jun和P65表达的影响。应用蛋白质组学技术,比较空白质粒和阳性质粒转染细胞的蛋白表达谱,并应用RT-PCR验证获得的差异蛋白质点,系统探讨RASSF1A基因抑制胃癌细胞SGC7901生长的作用机制。结果:经脂质体转染和筛选,建立了高表达RASSF1A基因的SGC7901细胞系。MTT结果显示:与未转染组和空白质粒转染组比较,阳性质粒转染组SGC7901细胞生长速度明显减慢,48 h细胞生长抑制率为28.13%。流式细胞术结果显示:与未转染组和空白质粒转染组相比,阳性质粒转染组SGC7901细胞G₀/G₁期细胞比例明显增加,而S期比例减少,细胞凋亡率有所增加。平板克隆形成试验结果显示:未转染组、空白质粒转染组和阳性质粒转染组SGC7901细胞的克隆形成率分别为38.6±1.5%,39.7±2.1%和7.3±0.6%,阳性质粒转染组克隆形成率明显减少。裸鼠成瘤试验结果显示:未转染组、空白质粒转染组和阳性质粒转染组SGC7901细胞成瘤潜伏期均为7天,瘤体重量分别为（1.4±0.26）g、（1.5±0.32）g和（0.6±0.1）g,阳性质粒转染组裸鼠成瘤抑制率为57.1%。在细胞未作处理时,与未转染组和空白质粒转染组比较,阳性质粒转染组细胞NF-κB DNA结合活性明显降低。长春新碱作用12h和24h后,三组细胞NF-κB DNA结合活性下降;但与未转染组和空白质粒转染组比较,阳性质粒转染组SGC7901细胞NF-κB DNA结合活性下降更明显。在阿糖胞苷作用12h后,SGC7901细胞NF-κBDNA结合活性上升;但阳性质粒转染组SGC7901细胞NF-κB DNA结合活性较未转染组和空白质粒转染组出现明显下降。Western blot和免疫细胞化学结果显示:与未转染组和空白质粒转染组比较,阳性质粒转染组SGC7901细胞全细胞中p65表达明显降低,细胞核中p65表达也降低。与未转染组和空白质粒转染组比较,阳性质粒转染组SGC7901细胞AP-1 DNA结合活性明显降低。Western blot和免疫细胞化学结果显示:与未转染组和空白质粒转染组比较,阳性质粒转染组SGC7901细胞c-Fos表达明显降低,但c-Jun表达未见明显变化。蛋白质组学结果显示:通过双向凝胶电泳分别分离RASSF1A转染细胞和pcDNA3.0空白质粒转染细胞的总蛋白质,测得两组细胞的蛋白质斑点数分别为869±23和792±53个;位置重复性分析表明阳性质粒转染组SGC7901细胞在等电聚焦（IEF）方向上的平均偏差为0.856±0.113 mm,在垂直板SDS-PAGE电泳方向上的平均位置偏差为1.021±0.129mm;空白质粒转染SGC7901细胞在IEF方向上的平均偏差为0.847±0.125 mm,在垂直板SDS-PAGE电泳方向上的平均位置偏差为1.105±0.127 mm。以上结果表明我们成功地建立了分辨率较高、重复性较好的阳性质粒转染组细胞和空白质粒转染细胞的二维凝胶电泳图谱。将阳性质粒转染组细胞和空白质粒转染细胞2D凝胶图谱上的蛋白质点进行匹配分析,平均匹配点数为695±18个,获得差异点35个。随机选取12个蛋白质差异点,凝胶内原位酶解后,将经MALDI-TOF质谱分析获得的肽质量指纹图（PMF）搜索MS数据库,成功鉴定8个蛋白质,包括Galectin-1、TRP-14、ACBP、PSMB5、PSMB4、TIM、Vimentin、CD79。进一步应用RT-PCR检测了Galectin-1、TRP-14、ACBP在SGC7901细胞中的表达,发现转染组细胞Galectin-1、TRP-14、ACBP表达高于对照组,表明RASSF1A能上调Galectin-1、TRP-14、ACBP的表达。结论:1、RASSF1A过表达能抑制胃癌细胞SGC7901的生长。RASSF1A可能是胃癌抑制基因;2、抑制胃癌细胞SGC7901 NF-κB、AP-1活性可能是RASSF1A抑制胃癌细胞生长的机制之一;3、我们通过建立分辨率较高、重复性较好的空白质粒和阳性质粒转染SGC7901细胞的二维凝胶电泳图谱,首次发现RASSF1A过表达诱导了胃癌细胞SGC7901的Galectin-1、TRP-14、ABCP表达上调。