背景及目的：随着移植免疫理论和移植外科技术的发展，器官移植广泛应用于临床。然而，同种异基因器官供体远远不能满足临床的需求量。异种移植有可能解决这一矛盾。尽管目前的免疫抑制方案对同种异体移植提供了满意的短期和中期结果，但这些措施不足以阻止异种器官的排斥。实际上，除了超急性排斥反应和迟发异种移植物排斥反应有别于同种移植排斥之外，异种移植中细胞介导的排斥反应也强于同种移植，并且不易被同种移植中有效的免疫抑制剂所抑制，单纯增加免疫抑制剂的剂量不可能完成成功的异种移植。因此，在异种器官移植前探索其它方法诱导供体特异性的耐受已成为异种移植研究的重点。目前，在异种移植中诱导供体特异性的免疫耐受主要有两种方法，通过骨髓移植建立混合性嵌合体和异种胸腺/肝脏移植诱导耐受。但通过异种骨髓移植建立混合性嵌合体的方法存在一定的局限性。首先，由于种属间的不相容性，如宿主源生长因子或骨髓基质与供体源造血干细胞之间，阻止建立长期稳定的嵌合体。其次，异种骨髓移植后存在发生移植物抗宿主病（GVHD）的危险。胸腺不仅在建立和塑造有功能的T细胞库中发挥作用，而且对诱导和维持自身耐受和移植耐受起关键作用。在协调型和非协调型异种胸腺移植的鼠模型中已证实，异种胸腺可支持T细胞的重建和诱导供体特异性的T细胞耐受。异种(xenogeneic)胸腺移植可诱导供体特异性的免疫耐受，但其面临的主要问题是宿主T细胞在异种胸腺内成熟后不能产生对宿主抗原足够的自身耐受。最近研究表明，所有植入了异种胸腺的大鼠和小鼠，均发生了多器官的自身免疫损害，如甲状腺炎、泪腺炎、卵巢炎以及胃炎等，而同系(syngeneic)或同种(allogeneic)胸腺移植的受体未发生自身免疫综合征。对自身免疫综合征的一个解释是异种胸腺移植导致了自身反应性效应T细胞和调节性T细胞之间的失衡。现已证实，胸腺内可异位或混杂表达许多自身抗原的mRNA，如胰岛素、甲状腺球蛋白以及髓鞘碱性蛋白等。推测胸腺上皮对诱导组织特异性的耐受起非常重要的作用。因此，本课题考虑将同系胸腺混入异种胸腺后再进行移植，有可能弥补异种胸腺上皮由于种属间的差异所造成的某些不足，以期达到既能诱导供体特异性的免疫耐受，又能阻碍自身免疫损害发生的目的。方法：建立F344胎大鼠胸腺和混合(F344+BALB/c)胎胸腺裸小鼠左肾包膜下移植模<WP=11>1、 型，以期重建裸小鼠的T细胞库。2、 胸腺移植3月后，通过FACS技术检测受者裸小鼠中CD4+T和CD8+T细胞的重建情况，在此基础上，检测重建T细胞在体外对ConA以及异体淋巴细胞的反应性，以期了解裸小鼠T细胞库重建成功后T细胞的功能状态。3、 利用组织学和免疫组织化学技术，观察移植胸腺的结构以及受者骨髓源细胞在胸腺移植物内的分布情况。4、 混合胎胸腺移植3月后，进行异种供体F344大鼠和第三方无关供体C57BL/6小鼠皮肤移植实验，观察皮肤移植物存活以及病理组织学的变化；利用单向MLR，检测受者脾细胞对异体淋巴细胞的反应性，以期了解胸腺移植后受者是否具有抗原特异性的免疫耐受状态。5、 利用脾细胞过继转移，同时移植胸腺供体来源的F344大鼠和第三方无关供体C57BL/6小鼠皮肤，观察对异种供体抗原已产生耐受的受者脾细胞，能否将耐受状态过继转移至正常BALB/c小鼠。6、 利用ELISA法检测MLR上清液中IL-2，IL-4的含量，以期了解Th1/Th2漂移在胸腺移植诱导抗原特异性免疫耐受中的作用。7、 观察胸腺移植后受者各器官（包括肾、肝、肺、心、颌下腺、胃等）的病理变化，并利用间接免疫荧光法，检测胸腺移植后受者血清中的循环自身抗体，以期了解混合胎胸腺移植在预防自身免疫损害中的作用。结果：1、 移植胸腺的发育和结构：移植的胎胸腺组织在裸鼠的肾包膜下能够正常发育，胎胸腺移植6月后显示，移植胸腺呈扁球形，大小约为5×5×3mm3，表面可见数条细小的血管。HE染色发现，移植胸腺具有正常的皮质和髓质结构，皮质和髓质中充满大量的胸腺细胞。免疫组化染色显示，在单纯异种大鼠移植的胸腺内，MHCⅠ类抗原阳性细胞主要是位于皮质深层和髓质中的胸腺细胞；MHC Ⅱ类抗原阳性细胞主要位于髓质，具有典型的树突样外观。在混合胎胸腺移植物中，MHCⅠ类抗原阳性细胞仍主要是位于皮质深层和髓质中的胸腺细胞。MHC Ⅱ类抗原阳性细胞在皮质和髓质中均有不同程度表达，髓质中的阳性细胞具有典型树突样外观。 2、胸腺移植后受者中T细胞的重建水平和体外反应性：F344胎大鼠胸腺及混合胎胸腺移植后，均能够有效重建受者裸小鼠外周血中的CD4+T和CD8+T细胞。F344胎大鼠胸腺移植3月后，CD4+T和CD8+T细胞占外周血白细胞的百分率分别为6.87±2.11%和9.46±1.84%；混合胎胸腺移植3月后，CD4+T和CD8+T细胞占外周血白细胞的百分率分别为13.22±4.38%和9.69±2.98 %。体外功<WP=12>能测定显示，受者脾细胞对ConA的刺激有良好的反应性（stimulation index，SI为6.99），对胸腺供体来源的F344大鼠脾细胞低反应（SI为1.51），对第三方无关供体C57BL/6小鼠的脾细胞保持有效的反应性(SI为2.43)。3、混合胎胸腺移植诱导供体特异性皮肤移?