论文部分内容阅读
目的：1.检测PTPRO (Protein tyrosine phosphatase receptor-type O，受体O型蛋白质酪氨酸磷酸酶)在人类肝细胞肝癌(HCC)中的表达水平,研究该基因的表达是否具有性别差异，观察其与HCC切除术后肿瘤复发的相关性，阐明是否可以作为判断预后的指标；2.检测雌激素受体（ER）在HCC中的表达水平及与PTPRO的相关性，研究雌激素信号通路对PTPRO表达的调节作用。方法：1.利用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和免疫组织化学（IHC）方法，分别检测59例男性及22例女性HCC患者肿瘤组织及癌旁组织中PTPRO及雌激素受体的表达水平；2.通过t检验分析PTPRO、ER在肿瘤、瘤旁及不同性别间的表达差异，并通过相关性分析及F检验了解PTPRO表达与ER是否具有相关性；3.通过Kaplan-Meier曲线研究不同PTPRO表达水平与HCC病人术后复发率之间的关系；4.利用慢病毒转染的方法构建ERα过表达的HCC细胞系Huh-7-ERα及SMCC-7721-ERα，并通过Real-time PCR及Western Blot检测PTPRO在细胞中表达水平的变化；5.克隆PTPRO启动子，利用PCR的方法构建启动子区域ERE（Estrogen responsive element）点突变，并通过荧光素酶报告基因技术检测ERE突变后启动子活性的变化，以研究ERα是否能调控PTPRO的转录。结果：1. PTPRO、ERα在HCC中的表达较之癌旁及正常组织明显发生下调（P<0.01）；2. PTPRO及ERα在男性癌旁中的表达显著低于女性，且PTPRO水平与ERα呈明显正相关（P<0.01）；3. PTPRO表达水平与HCC切除术后复发呈显著相关（P<0.01）；4. PTPRO蛋白及mRNA表达水平在ERα过表达后的Huh-7-及SMCC-7721中发生明显上调（P<0.001）；5. PTPRO启动子区域ERE突变后，启动子活性显著下降（P<0.001）。结论：1. PTPRO在HCC中的表达发生明显下调，且具有显著的性别差异；2.PTPRO水平与HCC切除术后复发相关，可作为一项监测预后的指标应用于临床；3.在HCC中同样下调的ERα能在转录水平上调PTPRO表达，从而解释了PTPRO在HCC中的表达下调以及性别差异。