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猪瘟(Classical swine fever, CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)引起的猪的急性高度接触性传染病,严重危害着世界养猪业的发展,被世界动物卫生组织(OIE)列为法定必须报告的传染病。CSFV为有囊膜的RNA病毒,病毒基因组仅有一个大的开放阅读框(ORF),编码E0(或Erns)、E1和E2 3种囊膜糖蛋白,其中E2基因是猪瘟病毒的主要保护性抗原,可以有效刺激机体产生中和抗体,抵抗CSFV强毒株的攻击。由于传统弱毒活疫苗接种后无法在血清学诊断上与自然感染强毒株相区别,弱毒活苗还能通过母体胎盘的感染造成死胎、弱仔、先天性感染仔猪,导致免疫耐受,而基因工程疫苗的出现为这一问题的解决提供了新的思路。因此,本试验选取E2基因在逆转录病毒的介导下转染永生化猪脐血管内皮细胞(swine umbilical vein endothelial cells, SUVECs),并表达在该细胞膜上,初步构建基因工程疫苗。且本试验所选用的永生化猪脐血管内皮细胞为一种生理状态下的细胞系,不具有致瘤性,不存在生物安全方面的问题,这在研究和开发猪瘟基因工程细胞苗方面具有相当大的潜力。本试验获得了以下结果:1.重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2的构建。RT-PCR扩增猪瘟病毒石门株E2基因,将其连接到重组逆转录病毒载体pBABE-puro中,经PCR扩增和酶切鉴定,证明E2基因成功插入重组逆转录病毒载体pBABE-puro中,重组载体构建成功。聚乙二醇法提取和纯化质粒,以备包装假病毒用。2.假病毒的包装。构建好的重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2与pVSV-G质粒经磷酸钙共转染法,转入293GP细胞中包装成逆转录病毒假病毒,36～48 h后收取上清,分装备用。3.表达E2基因阳性细胞的筛选和初步免疫试验。包装好的假病毒转入永生化猪脐血管内皮细胞,嘌呤霉素筛选出阳性细胞,对筛选出的阳性细胞进行流式细胞分析和分选;经间接免疫荧光染色试验和RT-PCR鉴定,猪瘟病毒石门株E2基因在永生化猪脐血管内皮细胞膜上表达成功。将表达E2蛋白的永生化的猪脐血管内皮细胞作为基因工程细胞苗腹腔免疫4周龄的Balb/c小鼠,免疫3次后,用ELISA法检测免疫鼠的血清,小鼠产生了抗猪瘟病毒E2蛋白的抗体,效价达1∶3 500。