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目的:验证胆碱通过抑制miR-376b保护H2O2诱导H9c2细胞的损伤。
方法:H9c2细胞随机分为5组:①对照组;②H2O2组;③H2O2+miR-NC组;④H2O2+miR-376b组;⑤H2O2+choline(胆碱)+miR-376b组。检测以下指标①MTT比色法检测细胞存活率;②激光共聚焦显微镜检测ROS改变量;③激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子变化。
结果:细胞存活率结果显示:H9c2细胞给予终浓度为100μmol/L的H2O2作用2h,用LipofectamineTM2000转染终浓度为100nmol/L的miRNA作用12h后,对照组H9c2细胞存活率标准化为1:①H2O2组为0.78,H2O2与对照组相比(P＜0.05),H2O2诱导了H9c2细胞的损伤;②H2O2+miR-NC为0.67,与H2O2组相比细胞存活率无明显差异;③miR-376b+H2O2组为0.62,与H2O2+miR-NC组相比细胞存活率明显降低(P＜0.05),结果显示miR-376b加重了H2O2诱导H9c2细胞的损伤;④H2O2 choline+miR-376b组为0.69,与H2O2+miR-376b组比较(P＜0.05),结果显示choline逆转了miR-376b加重H2O2诱导H9c2细胞的损伤作用。
ROS改变量的结果显示:H2O2组与对照组比较(P＜0.05),H2O2诱导了H9c2细胞的损伤;H2O2+miR-376b组与H2O2+miR-NC组相比较(P＜0.05),miR-376b加重了H2O2诱导H9c2细胞的损伤作用;H2O2+choline+miR-376b组与H2O2+miR-376b组比较(P＜0.05),cho逆转了miR376b的加重损伤作用(P＜0.05)。
细胞内钙离子变化结果显示:H2O2组激光共聚焦检测细胞内钙离子变化的结果较正常组比较明显升高。与H2O2+miR-NC组相比,加入miR-376b后细胞内钙离子变化又显著增高。但预加choline后,细胞内钙离子变化减弱。
结论:1、miR-376b可以加重H2O2对H9c2细胞的损伤;2、M3受体激动剂choline逆转了miR-376b对H9c2细胞损伤的加重作用。