酒在我们日常工作中是较为常见的饮品,但不合理饮用会对身体造成一定程度的损伤,并导致许多负面影响。近年来,全国范围内肝炎、肝硬化、急性肝损伤等疾病呈上升趋势,严重威胁人们的生命健康。姜黄素(Cur)具有保肝作用,本文以Cur为实验药物,通过体外细胞实验来探究Cur/m PEG-PBLA胶束对酒精性肝损伤的保护作用。具体研究内容及结果如下:1.筛选Cur/m PEG-PBLA胶束制备方法并对处方进行优化。确定使用透析法,有机溶剂使用二甲基亚砜(DMSO)、水与溶剂(DMSO)体积比2.5:1、投料比为20:1。2.使用透射电子显微镜(TEM)观察胶束形态,并对其稳定性和溶血性进行考察。并验证将Cur制备成胶束后是否改善了药物溶解度低、稳定性差的问题。结果显示,Cur/m PEG-PBLA胶束平均粒径为120～130 nm、Zeta电位为(-8.17±1.26)m V、P DI为0.20±0.014,形态呈球形。Cur/m PEG-PBLA胶束溶液可以改善药物稳定性,并能降低降解速度。胶束溶液具备良好的稀释、储存、血浆稳定性。通过颜色的观察和溶血率的计算,证实聚合物胶束未发生溶血现象,不会对血液中的红细胞进行破坏,具备良好的血液相容性。3.建立Cur含量测定的方法,计算Cur/m PEG-PBLA胶束的载药量(DL)及包封率(EE),并对其体外释放情况进行实验。标准曲线为Y=208727X-78088(R~2=0.9999),线性范围内有良好的线性关系,精密度、稳定性、方法回收率、加样回收率实验结果均符合规定,载药量为(4.87±0.42)%,包封率为(73.26±3.16)%;在体外释放实验中Cur/m PEG-PBLA胶束表现出缓慢的药物累积释放情况,10 h累积释放量仅有28.94%,48 h累积释放为48.25%,具备较好的缓释效果。4.细胞损伤模型的建立。选用肝癌细胞(Hep G-2)和正常肝细胞(7702)两种,无水乙醇作为诱导剂,用MTT(噻唑蓝)法测定并计算细胞存活率,选择最适建模条件。初步选择Hep G-2细胞损伤模型用400 mmol/L无水乙醇,作用12 h,此时细胞存活率为70.82%;7702细胞造模浓度为400 mmol/L,作用12 h,细胞存活率为73.13%。为了进一步验证造模条件的可靠性,在该条件下用试剂盒测定细胞上清液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)值。结果显示,Hep G-2细胞模型组ALT数值是对照组的1.7倍,AST数值是对照组的1.95倍;7702细胞模型组ALT值是对照组的2.27倍,AST值是对照组的2.75倍。验证了肝细胞损伤造模成功,将选择400 mmol/L无水乙醇作用12 h作为造模最佳条件。5.Cur/m PEG-PBLA胶束对酒精性肝损伤的保护作用,从预防和修复两个方面进行研究。首先考察胶束溶液及姜黄素溶液对细胞的毒性实验,结果表明当两种溶液浓度在1～10μg/m L时对两种细胞无毒害作用。6.Hep G-2细胞:在预防作用上,当胶束浓度在2～10μg/m L时与模型组相比,有明显的差异性,当浓度为10μg/m L时,细胞存活率达到108.04%,与模型组差异更为显著,对细胞损伤预防作用最为明显;姜黄素溶液浓度在1～10μg/m L时与模型组相比,有明显的差异性,当浓度为10μg/m L时,细胞存活率达到109.87%,与模型组差异更为显著(P<0.001);在修复作用上,当胶束溶液浓度在4～10μg/m L时与模型组相比,均有显著性差异,而浓度为10μg/m L时,细胞存活率达到93.78%,与模型组差异更为显著;姜黄素溶液浓度在2～10μg/m L时,细胞存活率得到提高并呈剂量依赖性;当姜黄素溶液浓度在4～10μg/m L范围内与模型组相比,均有显著性差异(P<0.0154),而浓度为10μg/m L时,细胞存活率达到97.36%,与模型组差异更为显著(P<0.001)。总之,两种溶液对Hep G-2细胞损伤模型有预防及修复作用,当浓度越高时效果越明显。7.7702细胞:在预防作用上,胶束浓度在2～10μg/m L时,与模型组相比显著提高了细胞存活率,均与模型组有显著性差异,并呈剂量依赖性。当胶束浓度在10μg/m L时,细胞存活率达到101.95%,与模型组差异更为显著;姜黄素溶液浓度在2～10μg/m L时,细胞存活率得到提高,并与模型组相比有显著性差异。在修复作用上,胶束浓度在4～10μg/m L时,与模型组相比显著提高了细胞存活率,有显著性差异并呈剂量依赖性。当胶束浓度为10μg/m L时,细胞存活率达到90.23%,与模型组相比有显著性差异。姜黄素溶液浓度在4～10μg/m L时,细胞存活率与模型组相比有显著性差异(P<0.001),具有修复效果。总之,两种溶液对7702细胞损伤模型有预防及修复作用,当浓度越高时效果越明显。