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目的ZHX1(zinc finger and homeobox 1)是ZHX家族(ZHX1,ZHX2,ZHX3)的一员,很有可能扮演转录抑制因子的作用。有研究表明ZHX1在癌症的发展过程发挥重要的作用,如胃癌,肝癌,胆管癌,肾癌等。但是关于ZHX1在胰腺癌中的相关研究暂未有报道。在本研究中,我们探讨ZHX1在胰腺癌中的表达、功能以及相关机制。方法(1)利用IHC(免疫组织化学法)检测ZHX1在53对胰腺癌组织和对应非癌组织中的定位及表达,分析ZHX1的表达与临床病理因素的关系;利用免疫荧光法(IF)检测ZHX1在胰腺癌细胞中的表达部位;(2)利用RT-PCR(逆转录聚合酶联反应)和Western blot(蛋白印迹实验)检测ZHX1在胰腺癌细胞株SW1990,CFPAC-1,Patu8988,PL45,和Panc-1中的表达情况,分别用si RNA-ZHX1转染胰腺癌细胞株靶向沉默ZHX1的表达,用ZHX1过表达质粒转染至胰腺癌细胞株,利用RT-PCR和Western blot确认si RNA沉默及质粒过表达ZHX1的效率;(3)下调及上调ZHX1表达后,利用细胞侵袭实验、划痕实验、平板克隆形成实验及CCK8实验检测胰腺癌细胞系细胞侵袭、迁移及增殖活性变化;(4)通过生物信息分析发现,mi R-186-5p特异性结合ZHX1 m RNA 3’-UTR;转录因子YY1可结合ZHX1的启动子区域;转录因子YY1可结合mi R-186的启动子区域;(5)利用CHIP实验验证YY1可结合ZHX1、mi R-186的启动子区域,双荧光素酶实验探究YY1对ZHX1、mi R-186转录的影响及mi R-186-5p对ZHX1转录后的调控;用RT-PCR和Western blot验证mi R-186-5p对ZHX1转录后的调控。(6)沉默及上调ZHX1表达后,Western blot实验检测p-AKT磷酸化水平变化。AKT变构抑制剂MK2206验证p-AKT磷酸化在ZHX1调节胰腺癌侵袭、迁移及增殖性过程中的作用。结果:(1)ZHX1主要表达于胞核,细胞胞质稍有表达。在胰腺癌组织中表达阳性率为26.4%(14/53),非癌组织中表达阳性率为77.3%(41/53)。ZHX1在胰腺癌组织中的阳性率明显低于非癌胰腺组织(χ2=27.549,P<0.05),ZHX1的表达与肿瘤肿瘤大小、肿瘤分化程度及病理分期相关(P<0.05)。(2)下调ZHX1表达后,胰腺癌细胞的侵袭、迁移及增殖能力增强,ZHX1表达上调后胰腺癌细胞的侵袭、迁移及增殖能力明显下降。(2)在胰腺癌细胞中,YY1可与ZHX1、mi R-186的启动子区结合。YY1抑制ZHX1的转录水平,YY1促进mi R-186的转录,mi R-186-5p特异性结合ZHX1m RNA,抑制ZHX1转录后的翻译。(3)在胰腺癌细胞中ZHX1调控AKT的磷酸化水平,即过表达ZHX1后,AKT磷酸化水平下降(P<0.05);下调ZHX1后,AKT磷酸化水平上升(P<0.05)。(4)AKT变构抑制剂MK2206可以阻断ZHX1下调引起的AKT过度磷酸化,及抑制ZHX1下调后引起的促进胰腺癌侵袭、转移及增殖性的作用。结论:ZHX1蛋白主要在胰腺癌细胞核中表达,ZHX1在胰腺癌组织中低表达,并且胰腺癌组织中ZHX1蛋白的表达水平与胰腺癌肿瘤的大小、肿瘤的分化程度及病理分期密切相关。在胰腺癌细胞中ZHX1抑制胰腺癌的侵袭、迁移和增殖。转录因子YY1和mi R-186-5p分别于转录水平及转录后水平调控ZHX1的表达,且YY1可于转录水平促进mi R-186的表达。ZHX1通过抑制p-AKT磷酸化调控胰腺癌细胞的侵袭、迁移和增殖。