【摘 要】
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目的:探索当归素在低氧环境中对PC-3增殖、迁移、侵袭与干细胞特性的影响;以及当归素对PC-3条件培养基中血管生成及破骨细胞分化的作用,为其发挥抗肿瘤作用提供实验参考。方法:（1）CCK-8检测不同浓度当归素溶液在低氧条件下对PC-3细胞增殖的影响。（2）细胞粘附实验、细胞划痕实验及Transwell实验评估不同浓度当归素溶液在低氧条件下对PC-3细胞的粘附、迁移及侵袭的影响。（3）球体形成实验、
【基金项目】
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国家自然科学基金（81860322）; PLCL2调控miR-204-5p影响PCa骨转移的作用机制研究,黔科合基础-ZK[2021]重点007,2021/4/1-2025/4/1','0753','HXWuY_6MMkK7xFtlCdEU7-97uJLGYKAz2UiO8xBhPLhAyDtwFmbiCg==');
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目的:探索当归素在低氧环境中对PC-3增殖、迁移、侵袭与干细胞特性的影响;以及当归素对PC-3条件培养基中血管生成及破骨细胞分化的作用,为其发挥抗肿瘤作用提供实验参考。方法:（1）CCK-8检测不同浓度当归素溶液在低氧条件下对PC-3细胞增殖的影响。（2）细胞粘附实验、细胞划痕实验及Transwell实验评估不同浓度当归素溶液在低氧条件下对PC-3细胞的粘附、迁移及侵袭的影响。（3）球体形成实验、集落形成实验检测不同浓度梯度当归素溶液是否影响PC-3细胞在低氧环境下的肿瘤干细胞特性,并通过Western blot检测相关干性标记物。（4）用不同浓度当归素溶液处理PC-3细胞,通过ELISA实验对PC-3细胞培养基上清液进行分析,评估PC-3细胞神经内分泌相关因子的表达。（5）使用制备的PC-3细胞低氧CM培养BM-EPCs,加入不同浓度梯度当归素溶液,通过血管生成实验评估BM-EPCs分化成血管能力,并通过ELISA实验检测VEGF的分泌。（6）使用制备的PC-3细胞低氧CM培养RAW 264.7细胞,通过破骨细胞分化实验检测不同浓度当归素溶液对破骨细胞分化的影响。结果:（1）CCK-8结果表明在低氧环境中,PC-3细胞增殖能力随当归素溶液浓度提高而降低,与对照组相比,15μM及以上浓度当归素溶液可明显抑制PC-3细胞增殖（P＜0.01）。（2）细胞粘附实验结果提示,随着当归素溶液浓度不断增加,PC-3细胞在低氧下的粘附能力下降;细胞划痕实验结果表明,随着当归素溶液浓度不断增加,PC-3细胞在低氧下的迁移能力明显受到抑制,其中60μM的当归素溶液抑制作用最显著;Transwell实验结果提示,随着当归素溶液浓度不断增加,PC-3细胞在低氧条件下的侵袭能力明显受到抑制,与对照组比较,差异具有统计学意义（P＜0.01）。（3）球体形成实验、集落形成实验结果显示,PC-3细胞在低氧条件下球化和集落的形成明显受到了当归素的抑制,60μM的当归素溶液抑制作用最明显,较对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.01）;Western blot实验结果显示当归素溶液处理后PC-3细胞的相关干性标记物CD44、OCT4和AGO2表达受到抑制。（4）ELISA实验结果显示,PC-3细胞在低氧环境下促进了PC-3细胞分泌MMP-2/9、IL-6/8、IL-1β和TNF-α,而经当归素处理后分泌均减少,差异较对照组相比具有统计学意义（P＜0.01）。（5）血管生成实验结果显示,随着当归素浓度增加,实验组血管生成的数目和厚度均明显降低;ELISA实验结果表明,当归素60μM浓度处理后,BM-EPCs分泌VEGF最少,差异较对照组具有统计学意义（P＜0.01）。（6）破骨细胞实验结果显示当归素处理组随着浓度的增高,在不同程度上抑制了破骨细胞分化,与对照组相比,以60μM最为显著（P＜0.01）。结论:当归素在低氧条件下能抑制PCa骨转移细胞的增殖、迁移、侵袭、肿瘤干细胞特性及神经内分泌相关因子表达,亦能抑制体外肿瘤微环境中血管形成及破骨细胞分化。
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