白菜ASY1过表达载体构建及转化甘蓝型油菜研究

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拟南芥ASY1基因编码的蛋白为减数分裂过程中联会复合体形成的重要辅助蛋白,该基因突变可以导致联会复合体形成失败,染色体不能正常配对,从而导致花粉败育。水稻和小麦中分别发现有同源基因PAIR2和TaASY1。研究发现小麦中,在 Ph1(控制同源染色体配对的基因位点)存在和缺失背景下,TaASY1的表达量变化很大,可能为Ph1能够调节同源染色体准确配对的重要机制;十字花科中的Arabidopsis arenosa同源四倍体与其二倍体群体的重测序及遗传分析表明,ASY1基因许多与倍性相关的变异位点受到了选择,可能是保证天然的四倍体具有类似二倍体染色体配对行为的重要原因。因此,ASY1无论是在二倍体种或者多倍体中,都是决定或者影响同源染色体间能否正常配对的重要基因。甘蓝型油菜(B. napus,AACC)为天然白菜(B. rapa,AA)及甘蓝(B. oleracea, CC)经天然杂交和加倍而来的异源四倍体,进化时间大约为1-10万年,为植物多倍体研究的模式材料之一。已有的研究发现,白菜和甘蓝基因组中各有一个拷贝的ASY1基因。本研究通过ASY1超表达载体的构建与农杆菌介导的转化研究,将来自白菜的ASY1基因导入甘蓝型油菜“Westar”中,希望了解在ASY1超表达背景下,甘蓝型油菜减数分裂中染色体的相关行为,为进一步明晰芸薹属 ASY1基因的具体功能奠定基础。主要结果如下:(1)利用植物表达载体PBI121构建了ASY1超表达载体;(2)利用农杆菌介导法将ASY1表达载体导入甘蓝型油菜Westar中,经卡那霉素筛选和 PCR检测初步确定得到17株阳性苗,转化率为54.84%;(3)对比阳性转基因植株和未转化植株,减数分裂中染色体行为无显著差别;但意外发现转基因植株的初花期比未转化植株晚两个星期左右;(4)改进了甘蓝型油菜 Westar的再生体系。该体系下,下胚轴愈伤组织诱导率和再生率分别为80.99%和70.41%,子叶的愈伤组织诱导率和再生频率分别为63.21%和46.27%。在该体系下采用下胚轴为外植体可获得更好的转化效果。
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