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[目的]由于拓扑异构酶Ⅱα(TopoisomeraseⅡα)基因TOP2A在染色体分离、配对、浓缩、结构形成及改变DNA超螺旋结构有重要的作用,并且又是很多肿瘤化疗药物的作用靶点,因此它在肿瘤治疗中引起了特殊的关注。我科基因芯片结果发现胃腺癌组织中的TOP2A明显高表达,本课题拟通过病例调查,明确TOP2A在人胃癌组织中的表达特征,并进一步建立TOP2A基因低表达的胃腺癌细胞模型,明确抑制TOP2A蛋白表达对其生物学行为的影响,为将来探讨TOP2A蛋白表达对topoⅡ抑制剂的疗效的预测作用提供良好的基础。[方法]本研究共分两部分:第一部分,首先从2004年-2008年从本院就诊的胃癌患者中筛选出做TOP2A蛋白免疫组化染色患者200例,根据其TOP2A蛋白表达量的高低及分化程度、病变部位分组进行统计分析;其次,用WesternBloting(WB)法检验胃癌细胞株MGC-803、BGC-823及乳腺癌细胞株MCF-7中TOP2A蛋白的表达。第二部分,设计构建针对TOP2A基因的shRNA(smallhairpin RNA,短发夹RNA)重组表达质粒pSRZTopⅡα并转染至G3T-hi包装细胞,收集绿色荧光蛋白表达阳性的包装细胞病毒上清,测定病毒滴度,感染三株目的细胞BGC-823、MGC-803及MCF-7,流式分选阳性克隆,扩增并培养。WB检测三株目的细胞感染重组逆转录病毒pSRZTopⅡα后细胞内TOP2A的表达情况,并用细胞生长曲线的方法记录感染病毒前后细胞生长状态及活性的变化。[结果]第一部分,200例TOP2A蛋白表达阳性患者其表达量的高低与患者年龄、性别、胃癌分化程度及胃癌部位并无相关性:胃腺癌细胞BGC-823、MGC-803和乳腺癌细胞MCF-7的总蛋白进行Western bloting检测,均有TOP2A的表达。第二部分,酶切及测序鉴定pSRZTopⅡα质粒构建成功,pSRZTopⅡα表达质粒转染至G3T-hi包装细胞后收集病毒上清,病毒滴度测定结果最高达1.87×10~7,由此证实逆转录病毒构建成功;目的细胞感染病毒并分选后进行荧光显微镜观察,64h的荧光蛋白表达比率较17h明显增高,证实逆转录病毒感染目的细胞成功,三株目的细胞感染后TOP2A蛋白表达较阴性对照组明显降低,胃腺癌细胞MGC-803细胞生长趋势较未感染组和阴性对照组明显减慢,各时间点细胞计数值明显降低。[结论]1.靶向TOP2A的shRNA能瞬时抑制TOP2A蛋白的表达:2.靶向抑制TOP2A基因的表达可以相对抑制肿瘤细胞的生长;3.首次构建低表达TOP2A的腺癌细胞模型成功。