实时定量PCR检测肠集聚性大肠埃希菌方法的建立

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肠集聚性大肠埃希菌(EAggEC)在近十年作为水源性腹泻致病菌日益受到重视。EAggEC已经从儿童和成人中分离出来,能引起持续性腹泻。EAggEC是由于其能粘附到上皮细胞如HEp-2,在表面形成特有“砖块样”形状而命名。虽然已经有了对EAggEC的毒力因子的许多研究,但对其如何引起持续性腹泻还是不清楚。另外,由于细胞自凝使血清型确定很困难。确定EAggEC的标准方法是利用其能粘附到上皮细胞如HEp-2,在表面形成特有“砖块样”形状。虽然这种方法比较可靠,但还会有“非典型”EAggEC被发现。另外这种方法耗时耗力,并需要组织培养实验室。许多分子生物学分析技术已被应用,但没有一个技术能达到100%特异性。荧光PCR技术是一种新型的核酸检测技术,实时荧光PCR技术具有高灵敏度、高特异性、无需PCR反应后处理步骤等优点,近年来被广泛应用于分子生物学研究领域,尤其在临床检验方面,该技术提供了有力的支持。利用SYBR Green I能和双链DNA结合的特性,通过对试验条件的优化,实现了对EAggEC的实时荧光PCR检测。试验结果表明建立的SYBR Green I实时荧光PCR方法的特异性、敏感性、重复性均达到试验设计要求。
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