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血管肉瘤(Angiosarcoma)是一种间叶细胞源性恶性肿瘤,其肿瘤细胞具有一定正常血管内皮细胞的形态和功能特征。血管肉瘤发病率较低,在软组织肉瘤中比例小于2%,肿瘤细胞呈侵袭性生长,恶性程度极高。目前血管肉瘤诊断主要靠病理组织方法,对疑难病例的诊断缺乏特异性的指标,易造成误诊；血管肉瘤治疗主要采取手术和化疗,治疗效果较差,其中位生存率仅为1.5年。因此,寻找新的临床诊断和治疗方法具有较大临床意义。现有研究显示miRNA的异常表达在肿瘤的发生发展中起着重要作用,已有部分肿瘤通过miRNA表达谱筛选出差异表达的miRNA,有潜力作为临床诊断、判断预后的标志物,并通过其肿瘤相关靶基因研究来开发潜在靶向治疗药物,这为我们研究血管肉瘤提供了新的思路。因此,我们尝试对血管肉瘤进行miRNA表达谱筛选,以毛细血管瘤(capillary hemangiomas)作为良性对照,对获得的差异表达miRNA进行靶基因和信号通路预测分析,为血管肉瘤的临床诊断提供分子标志物,同时为研究其发生发展规律提供新的策略。本研究分两个部分。第一部分：血管肉瘤miRNA表达谱分析目的：筛选出血管肉瘤中差异表达miRNA,并对其肿瘤相关靶基因和信号通路进行分析,为后续研究提供基础数据。方法：收集27例血管肉瘤和15例毛细血管瘤石蜡组织提取总RNA,并对其中3例血管肉瘤和3例毛细血管瘤进行miRNA表达谱芯片研究,挑选部分筛选出的差异miRNA使用qPCR进行扩大样本量验证。并通过生物信息学方法对筛选出的miRNA进行肿瘤相关靶基因和信号通路分析。结果：使用miRNA表达谱芯片筛选出了32个差异表达miRNA,其中18个表达上调,14个表达下调；信号值大于500,2倍差异以上的miRNA有12个,其中7个上调,5个下调。使用qPCR方法进行扩大样本量验证,成功筛选出了4个差异表达miRNA(miR-222-3P, miR-378-3p, miR-483-5p,miR-497-5p),并通过生物信息学方法获得了大量靶基因和信号通路信息。第二部分：hsa-miR-497-5p靶基因KCa3.1在血管肉瘤中的表达及其作用目的：检测KCa3.1在血管肉瘤中的表达,探讨KCa3.1在血管肉瘤中的生物学功能。方法：qPCR检测血管肉瘤细胞系ISO-HAS肿瘤相关14种钾离子通道的表达,并使用western blot、IHC进行相关蛋白检测,随后使用全细胞膜片钳进行相关离子通道电流检测；对筛选出的钾离子通道亚型在增殖、周期、侵袭等生物学功能进行研究。结果：在血管肉瘤细胞上检测到了KCa3.1基因和蛋白表达,同时使用IHC方法在20例血管肉瘤和15例毛细血管瘤组织检测Kca3.1的表达,15例毛细血管瘤组织表达均比较低,而17例血管肉瘤相对于毛细血管瘤显著高表达,其余3例表达较低。并使用全细胞膜片钳技术记录到了Kca3.1电流,平均电流大小为74pA,进一步确认了Kca3.1的表达。5μM,10μM,20μM的Kca3.1特异性阻断剂TRAM-34能显著抑制ISO-HAS细胞的增殖、增加G0-G1期比例,并显著降低其侵袭性；使用Kca3.1特异性siRNA能显著降低Kca3.1的表达,并抑制ISO-HAS细胞的增殖,增加G0-G1期比例。结论：通过对血管肉瘤miRNA表达谱分析,筛选出了4个差异表达的miRNA,并通过生物信息学方法获得了大量预测的肿瘤相关靶基因和信号通路信息,为血管肉瘤的临床诊断提供了潜在的诊断标志物；同时利用获得的生物信息学信息进行实验研究发现Kca3.1在血管肉瘤的增殖、周期、侵袭等生物学功能中起着重要作用,为进一步研究其发生发展规律提供了新的策略。