论文部分内容阅读
水稻条纹病毒（Rice stripe virus, RSV)是纤细病毒属的代表成员,其编码的蛋白NS2和NS3被鉴定为基因沉默抑制子。沉默抑制子一般具有核定位信号且定位在细胞核中,它在病毒侵染、扩散等过程中发挥着重要作用；大多数沉默抑制子与病毒的致病性相关,它们往往能促进病毒的积累与运动。研究表明,与RSV沉默抑制子作用于同一RNAi通路中的植物内源基因RDR1具有抵抗病毒的功能。因此,本文拟对水稻条纹病毒基因沉默抑制子NS2和NS3进行亚细胞定位观察,同时,利用水稻遗传转化体系构建RSV两个沉默抑制子共干扰和水稻RDR1-RNAi转基因水稻,对转基因水稻进行RSV抗性初步分析,这为进一步研究这三个基因的功能奠定良好基础。本文研究内容主要分为二部分。第一部分,RSV沉默抑制子的亚细胞定位观察。第二部分,构建NS(2+3)-RNAi和RDR1-RNAi转基因水稻及其RSV抗病性分析。获得如下结果：1明确了NS2和NS3的亚细胞定位。其中,NS2和NS3均能定位在细胞核,但NS2在细胞核中能形成球状颗粒,通过进一步的共定位法发现NS2能与柯浩体蛋白共定位。2获得NS(2+3)-RNAi和RDR1-RNAi T0代转基因植株。利用农杆菌介导法进行水稻遗传转化并得到转基因水稻,通过RT-PCR、qPCR和Southern blot对转基因植株进行鉴定和分析。3NS(2+3)-RNAi T0代转基因植株对RSV表现出一定抗病性。与对照水稻相比,转基因水稻在发病时间上推迟了12天,这暗示着RSV的沉默抑制子可能参与了病毒侵染过程。