艾灸对不同肿瘤模型的抑瘤机制研究

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目的:观察艾灸对不同小鼠移植瘤类型的抑瘤效果,并利用基因/蛋白芯片技术研究艾灸抑瘤作用机制。方法:(1)本课题选用恶性黑色素瘤细胞株B16和乳腺癌细胞株4T1,分别在体外构建小鼠移植瘤模型;(2)利用(47±1)℃的恒定高温灸治疗小鼠B16黑色素移植瘤以及4T1乳腺癌,观察其抑瘤作用;(3)应用基因芯片技术和蛋白芯片技术筛查肿瘤细胞内免疫细胞和微环境中的炎性因子表达的变化,并采用高通量分析方法得出其作用的信号通路及预测靶基因。结果:(1)成功构建了稳定携带生物发光荧光素酶(Luciferase)基因的细胞株,并在体外构建小鼠移植瘤模型:B16-F10/luc和4T1/luc;(2)利用(47±1)℃的恒定高温灸治疗小鼠B16黑色素移植瘤以及4T1乳腺癌,观察到:治疗早期(<9 days),艾灸对这两种肿瘤模型都有明显的直接抑瘤作用。然而,随着病程的延长(>12days),我们观察到艾灸抑瘤的长期疗效欠佳。在B16-F10/luc肿瘤组织中还伴有范围广程度较重的坏死和弥散性出血灶,以对照组最为严重;而艾灸能明显抑制肿瘤坏死和出血,尤以大椎组最佳。在4T1/luc肿瘤组织中,未见坏死和出血;(3)通过基因芯片对实验组和对照组肿瘤组织进行差异表达基因的筛查,筛选出33个显著差异基因,193个差异lncRNA,8个差异MicroRNA。蛋白芯片技术在检测的160个细胞因子中,共检测出显著差异因子共有3个。采用软件对发现的差异表达基因进行功能分类分析和信号转导通路分析发现,涉及免疫机制、血管生成、信号转导、肿瘤代谢等多个生物过程,表明艾灸是通过多途径发挥抗肿瘤作用。结论:研究证实大椎穴或关元穴化脓灸能显著抑制早期乳腺癌生长,而中后期抑瘤效果欠佳;但基因/蛋白芯片发现艾灸能导致肿瘤内免疫细胞和微环境中的炎性因子表达发生变化,早期恶性肿瘤的预后可能与这些差异表达的基因及细胞因子有关。
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