卵形蛋白家族转录因子AtOFP15对拟南芥荚果形态的调控

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转录因子(Transcription Factors)属于反式作用因子,是具有调控基因表达且具有特殊结构的蛋白质分子。转录因子可以和基因启动子区的顺式作用元件(Cis-acting element)相结合,进而抑制或者激活该基因的转录。转录因子在植物的生长发育、激素应答、次生代谢和抗逆性等方面都起着重要的调控作用。卵形家族蛋白(Ovate Family Proteins,OFPs)是植物所独有的一类转录因子,能够调节植物的生长发育。OFPs转录因子的功能在拟南芥、香蕉、番茄和水稻等植物中都有报道。拟南芥OFPs(AtOFPs)家族包含有19个成员。本论文的目的在于研究其成员之一,AtOFP15在调节荚果形态中的作用。为此,我们首先构建了GFP-AtOFP15融合蛋白,研究了AtOFP15在拟南芥中的亚细胞定位,结果发现AtOFP15定位在细胞核里。我们又通过原生质体瞬时转染技术确证AtOFP15是一个转录抑制子。为了进一步研究AtOFP15的转录抑制功能,我们构建了AtOFP15-VP16载体,通过原生质体瞬时转染和拟南芥植株转化等方法研究发现VP16能改变AtOFP15的转录活性,说明AtOFP15是一个被动抑制子。因为AtOFP15过量表达拟南芥转基因植株与erecta(er)突变体荚果形态非常类似,都为平末端荚果,我们推测AtOFP15基因和ERECTA(ER)基因在荚果形态调控上存在某种关联,可能在同一信号途径中调控拟南芥荚果形态。为了研究AtOFP15和ER的上下游关系,我们构建了pPZP221ER载体,并将其转入到过量表达AtOFP15的植株中,筛选得到双过表达纯合植株。通过观察发现过量表达ER基因可将AtOFP15过表达植株的表型恢复为野生型表型。而ofp15突变体植株与er突变体植株杂交获得的er ofp15双突变体仍为er突变体植株的表型。这些结果说明ER可能作用于AtOFP15的上游调控拟南芥的荚果形态。ER类受体蛋白激酶可通过磷酸化信号途径调控拟南芥的生长发育,我们推测ER可能通过调控AtOFP15的磷酸化状态参与调控拟南芥的荚果形态。因为氨基酸序列中脯氨酸前面的丝氨酸(serine,S)和苏氨酸(threonine,T)通常是蛋白质的磷酸化位点,而AtOFP15氨基酸序列中的第216位和第219位的丝氨酸(S)位于脯氨酸的前面,因此我们通过定点突变的方法使这两个位点维持非磷酸化(S/T-A)或持续磷酸化(S/T-D)状态,并构建相应的载体进行植物转化,获得了转基因植株,结果发现过表达植株都具有平末端荚果。说明这两个位点的磷酸化状态并不影响AtOFP15的功能。
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