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目的:对胚胎干细胞诱导分化的神经元进行鉴定,确定其中是否含有GABA能神经元;研究胚胎干细胞源性神经元移植对杏仁核电刺激点燃癫痫模型大鼠脑电及痫性发作行为的影响,以期为胚胎干细胞源性神经元进一步应用于细胞替代治疗积累理论和实践的经验。
材料与方法:利用无血清培养方法将ESC(胚胎干细胞)进行诱导分化成神经元,采用免疫荧光技术和RT-PCR方法及流式细胞仪检测技术进行鉴定分析。建立大鼠杏仁核电刺激点燃癫痫模型,将体外标记的带有绿色荧光蛋白的胚胎干细胞源性神经元的细胞混悬液移植入试验组,对照组给予生理盐水,于移植前2天、移植后第10天和第15天进行电刺激,通过ECoG(皮层脑电图)及视频监测仪记录和观察两组大鼠的痫性发作阈值、首次痫性发作级别、诱发4级发作的电脉冲串个数、ADT(后放电阈值)。最后,进行灌注取脑,石蜡包埋切片,一部分用免疫荧光方法观察移植细胞是否存在,另一部分做HE染色观察癫痫模型的电极位点是否在杏仁核区域。采用SPSS 13.0版软件进行统计学处理,用重复测量设计的方差分析方法统计。
结论:胚胎干细胞诱导分化成神经元后期含有GABA能神经元,GABA阳性细胞约占总细胞数的11.49±6.86﹪。胚胎干细胞源性神经元移植入杏仁核电刺激点燃癫模型的大鼠,短期内使大鼠的痫性发作阈值降低,未起到治疗癫痫的作用。