【摘 要】
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目的:本研究通过体外细胞实验,验证青海田鼠型鼠疫菌在感染人和小鼠巨噬细胞后,对细胞吞噬溶酶体抵抗能力是否存在差异。方法:本研究首先通过胞内生存实验比较青海田鼠型鼠疫
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目的:本研究通过体外细胞实验,验证青海田鼠型鼠疫菌在感染人和小鼠巨噬细胞后,对细胞吞噬溶酶体抵抗能力是否存在差异。方法:本研究首先通过胞内生存实验比较青海田鼠型鼠疫菌(Y.pestis 201)在人和小鼠巨噬细胞内的生存能力差别,再分别用化学荧光和免疫荧光方法观察田鼠型鼠疫菌与人和小鼠巨噬细胞的溶酶体及其各阶段标志物Rab5、Rab7和Lamp1共定位的情况,然后通过蛋白免疫印迹方法检测田鼠型鼠疫菌感染的人和小鼠巨噬细胞中吞噬溶酶体相关基因表达产物,如组织蛋白酶(CTSZ、CTSD)、AP1复合体(AP1S1)、Fe2+通道蛋白(MCOLN1)、Fe2+反向转运蛋白(Slc11a1)的表达情况,以比较田鼠型鼠疫菌在人和小鼠巨噬细胞中对吞噬溶酶体的抵抗能力差异。结果:胞内生存实验表明Y.pestis 201在U937来源的人巨噬细胞中生存能力较弱,32 h内被清除;但是在小鼠巨噬细胞RAW264.7中生存能力较强,32 h存活率约40%。化学荧光染色和免疫荧光实验表明:Y.pestis 201在U937来源的巨噬细胞中能够与溶酶体以及溶酶体各阶段标志物Rab5、Rab7和Lamp1存在共定位,不能形成可供Y.pestis 201复制的含菌囊泡(YCV);然而Y.pestis 201在RAW264.7中与溶酶体以及溶酶体各阶段膜表面标志物均无共定位,且形成有鼠疫菌大量复制的YCV。免疫印迹实验发现,Y.pestis 201感染U937来源的巨噬细胞和RAW264.7细胞后,CTSZ、CTSD、AP1S1、MCOLN1在U937来源的巨噬细胞中表达量较RAW264.7中高;但p H依赖性Slc11a1在RAW264.7中表达量较高。结论:田鼠型鼠疫菌在小鼠巨噬细胞中对吞噬溶酶体的抵抗能力比在人巨噬细胞中强。
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