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两栖类动物皮肤对其生存具有重要意义,它担负着如呼吸、水分调节、抵抗微生物、抵抗外界物理环境损伤等多种生理功能。目前,在两栖类皮肤中已鉴定出多种具有生物活性的蛋白质和多肽。对于两栖类动物皮肤分泌物中的生物活性成分的研究,会有助于我们更好的探索和理解两栖类动物皮肤的生理功能。 通过三步分离纯化过程:DEAE-Sephadex A-50离子交换,Sephadex G-100凝胶过滤和SephadexG-50凝胶过滤,我们从大蹼铃蟾(Bombina Maxima)皮肤分泌物中分离得到纯化的大蹼铃蟾PeroxiredoxinⅤ(BMS-PrdxⅥ)。SDS-PAGE电泳显示,该蛋白为单链蛋白质,在还原状态和非还原状态下下表观分子量为26kDa。经Western Blot方法鉴定和胰酶消化进行蛋白测序,得到两条内肽序列,进行Blast序列比对,确定是BMS-PrdxⅥ蛋白。进行活性检测发现,BMS-PrdxⅥ具有谷胱甘肽过氧化物酶的活性。 通过大蹼铃蟾(Bombina Maxima)转录组测序,我们得到peroxiredoxin家族中BMS-PrdxⅠ、BMS-PrdxⅤ、BMS-PrdxⅥ的部分序列。在此基础上,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),得到BMS-PrdxⅥ cDNA全序列,以及BMS-PrdxⅠ和BMS-PrdxⅤ的成熟肽部分的cDNA序列。根据BMS-PrdxⅥ序列设计引物,进行实时荧光定量,对大蹼铃蟾心、肝、脾、肺、肾、眼、脑、皮肤进行检测发现,皮肤BMS-PrdxⅥ的表达量是其他组织的4倍以上,提示其在皮肤中可能有重要的生理作用。