【摘 要】
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人体血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)是血管内皮生长因子(VEGF)介导的新生血管形成过程的重要特异性受体。新生血管的形成与恶性肿瘤的生长密切相关，因此以VEGFR-2的催化域(V
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人体血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)是血管内皮生长因子(VEGF)介导的新生血管形成过程的重要特异性受体。新生血管的形成与恶性肿瘤的生长密切相关，因此以VEGFR-2的催化域(VEGFR-2-CD)为靶点进行其抑制剂筛选与设计，已成为抗肿瘤生成的重要策略。然而如何简捷快速的合成高活性的VEGFR-2-CD正在成为研究的瓶颈。到目前为止，VEGFR-2-CD重组蛋白主要通过昆虫细胞胞内表达、链霉菌分泌表达以及毕赤酵母的胞内表达得到，但复杂的表达纯化条件严重影响后续抑制剂筛选效率。针对这些问题，本研究探索了利用大肠杆菌表达系统和毕赤酵母分泌表达体系进行高效表达、纯化VEGFR-2-CD的方法，并最终验证该重组蛋白是否可用于抑制剂筛选模型的构建。 本研究利用大肠杆菌GST标签表达体系表达了VEGFR-2-CD，使其首次在大肠杆菌表达系中得到了可溶性高效表达，并通过简单纯化步骤得到较高产量（3 mg/L发酵液）、高活性(11 U/L)及高纯度重组蛋白（纯度93％），确立了GST标签在VEGFR-2-CD表达中的有效性。最后利用激酶抑制剂PTK787验证了该重组蛋白可以用于抑制剂筛选。本方法与以往报道的表达方法相比，所得VEGFR-2-CD在产量、活性、及纯度上水平相当，而且本方法简便快速，可操作性更高，适用于以VEGFR-2-CD为靶点进行的抑制剂筛选模型的构建。
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