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目的：人类白细胞抗原基因复合体是目前人类基因组中最复杂的基因复合体之一,其39.8％基因座位的产物参与人类的免疫活动,也是多种自身免疫性疾病发病机制中的重要因素。重症肌无力的病因尚不清楚,认为可能是具有特定遗传易感性的人群在环境因素影响下触发的自身免疫性疾病,目前将MG主要易感基因定位于HLA区域。本研究的主要目的是系统探讨我国北方地区汉族MG患者HLA-A,-B,-DRB1基因座位的等位基因及单倍型的多态性,及其与MG患者不同临床亚型之间的相关性。
研究方法：运用聚合酶链反应-序列特异性的寡核苷酸探针杂交法对91例MG患者及171例健康对照进行HLA-A,-B,-DRB1等位基因分型,并应用最大似然法分析单倍型频率；采用病例-对照研究的方法,对各等位基因和单倍型与MG及其各亚型进行关联分析。
结果：
1.本研究应用PCR-SSOP方法在MG组和对照组共262名北方汉族人中检出HLA-A,-B,-DRB1基因座位的低分辨率等位基因共53种；其中HLA-A基因座位等位基因14种；HLA-B等位基因26种；HLA-DRB1等位基因13种。各座位在正常人群频率分布最高的等位基因分别是-A*02,-B*15,-DRB1*15；MG患者组分别为HLA-A*02,-B*40,-DRB1*09。
2.应用显性遗传模式的方法对HLA-A,-B,-DRB1各等位基因与MG进行关联分析发现:MG组HLA-DRB1*09等位基因频率较对照组升高；-A*31,-B*35,-B*38和-DRB1*08等位基因频率较对照组降低。
3.在不同MG临床亚型中进行HLA-A,-B,-DRB1各等位基因关联分析:
3.1性别分组:男性患者中-B*08,-B*46等位基因频率较对照组升高。女性患者中-A*30等位基因频率升高；-A*24,-A*31,-B*35等位基因频率较对照组降低。
3.2发病年龄分组:早发型MG患者中-A*33,-B*08,-DRB1*09等位基因频率升高；-A*31,-DRB1*08,-DRB1*14等位基因频率降低。晚发型MG患者中-B*54,-DRB1*07等位基因频率升高；-A*24,-B*35等位基因频率降低。
3.3 Osserman分型:眼肌型MG患者中-B*46,-DRB1*09等位基因频率升高；-B*35,-DRB1*12等位基因频率降低。全身型MG中-B*08,-B*13等位基因频率升高。
3.4抗体检查:在抗AChR抗体阳性的MG患者中,-DRB1*08等位基因频率降低。抗体阴性的MG患者中,-B*46,-DRB1*09等位基因频率升高；-B*51等位基因频率降低。
3.5胸腺病变情况:在非伴发胸腺瘤的MG患者中,-A*31,-B*38等位基因频率降低。而伴发胸腺瘤的MG患者中-A*01和-B*46等位基因频率升高。
4.各单倍型与MG的关联分析
两组中共推测A-B二座位单倍型有108种,A-DRB1二座位单倍型共92种,B-DRB1二座位单倍型共124种,A-B-DRB1三座位单倍型239种。各单倍型与MG的关联分析显示:A*02-B*46,B*46-DRB1*09,B*40-DRB1*15和A*02-B*46-DRB1*09与MG呈正相关；另外,B*58-DRB1*15、A*02-B*40-DRB1*15、A*11-B*15-DRB1*09和A*33-B*58-DRB1*15仅出现在MG组,也呈正相关。B*15-DRB1*15与MG呈负相关。A*24-DRB1*14和A*02-B*15-DRB1*15仅出现在对照组中,也呈负相关。
5.单倍型与不同MG亚型之间的分析
5.1性别分组:男性患者中,A*02-B*46(OR=9.17,p<0.001),B*46-DRB1*09(OR=9.17,p<0.001),A*02-B*46-DRB1*09(OR=13.92,p<0.001)单倍型频率升高。女性患者B*40-DRB1*15(OR=19.25,p<0.01)频率升高；B*58-DRB1*15和A*11-B*15-DRB1*09仅出现在女性患者中,也呈正相关(p<0.01)。
5.2发病年龄分组:早发型中A*02-B*46(OR=4.90,p<0.01),B*46-DRB1*09(OR=5.76,p<0.01),A*02-B*46-DRB1*09(OR=7.59,p<0.01)单倍型频率升高；B*58-DRB1*15和A*33-B*58-DRB1*15仅出现在早发型中,未出现在对照组中(p<0.01)。晚发型B*40-DRB1*15(OR=30.91,p<0.001)单倍型频率升高；A*02-B*40-DRB1*15仅出现在晚发型中(p<0.01)。
5.3 Osserman分型:眼肌型中A*02-B*46(OR=9.76,p<0.001),A*02-DRB1*09(OR=4.64,p<0.01),A*24-DRB1*09(OR=11.27,p<0.01),B*46-DRB1*09(OR=11.46,p<0.001),A*02-B*46-DRB1*09(OR=15.03,p<0.001)单倍型频率升高。全身型中B*40-DRB1*15(OR=2.35,p<0.01)单倍型频率升高；B*58-DRB1*15、A*24-B*15-DRB1*12和A*33-B*58-DRB1*15仅出现在全身型,也呈正相关(p<0.001)。
5.4抗体检查:抗体阳性MG患者组中B*40-DRB1*15(OR=26.84,p<0.001)单倍型频率升高,呈正相关；B*58-DRB1*15,A*02-B*40-DRB1*15、A*11-B*40-DRB1*15和A*33-B*58-DRB1*15仅在抗体阳性组中出现,也呈正相关(p<0.001)。抗体阴性组中,A*02-B*46(OR=8.52,p<0.001)、A*02-DRB1*09(OR=3.64,p<0.01)、B*46-DRB1*09(OR=3.17,p<0.001)、A*02-B*46-DRB1*09(OR=7.52,p<0.001)单倍型频率升高,呈正相关； A*11-B*15-DRB1*09仅出现在抗体阴性组中,未在对照组中发现(p<0.01)。
5.5胸腺病变情况:未伴发胸腺瘤组中,A*02-B*46(OR=11,p<0.01),B*40-DRB1*15(OR=20.52,p<0.001),B*46-DRB1*09(OR=4.42,p<0.01),A*02-B*46-DRB1*09(OR=6.71,p<0.01)单倍型频率升高；A*11-DRB1*11,A*02-B*40-DRB1*15和A*11-B*15-DRB1*09仅在未伴发胸腺瘤组中出现,也呈正相关(p<0.01)。胸腺瘤中B*46-DRB1*09(OR=11,p<0.01)单倍型频率升高；B*58-DRB1*15和A*33-B*58-DRB1*15仅出现在胸腺瘤组,对照组中未出现(p<0.01)。
结论:
1.本研究得到了我国北方汉族91例MG患者HLA-A,-B,-DRB1基因座位等位基因频率的分布数据,以及171例正常对照的HLA-A,-B,-DRB1基因座位的基因频率及等位基因频率,可以作为相关数据库的补充资料。
2.首次系统的、较大样本的探讨HLA-A,-B,-DRB1基因座位等位基因与我国北方地区MG患者及不同亚型的相关性:
2.1-DRB1*09与我国MG呈正相关,尤其是在早发型、眼肌型和抗体阴性组中关联最强；在不同的MG亚型中,-B*08和-B*46分别和不同的MG亚型(-B*08与男性、早发型、全身型；-B*46与男性、眼肌型、抗体阴性和伴发胸腺瘤组)存在正相关。
-A*01(伴发胸腺瘤组)、-A*30(女性)、-A*33(早发型)、-B*13(全身型)、-B*54(晚发型)和-DRB1*07(晚发型)可能也分别和我国MG患者的不同的亚型之间存在正相关；为首次报道。
2.2-A*31、-B*35、-B*38和-DRB1*08与MG呈负相关:-A*24(女性、晚发型)、-DRB1*12(眼肌型)、-DRB1*14(早发型)可能分别和不同的MG亚型存在负相关。
3.首次在HLA-A.-B,-DRB1基因座位上探讨各种单倍型与我国北方地区MG患者及不同亚型的相关性:
3.1 A*02-B*46-DRB1*09,A*02-B*46,B*46-DRB1*09和B*40-DRB1*15与MG呈正相关；前3者分别在男性、早发型、眼肌型、抗体阴性组和非伴发胸腺瘤组中的相关性更强；后者在女性、晚发型、全身型、抗体阳性和非伴发胸腺瘤组相关性更强。
B*58-DRB1*15,A*02-B*40-DRB1*15,A*11-B*15-DRB1*09和A*33-B*58-DRB1*15均属于出现频率较低的单倍型,且仅在MG组出现,未在对照组中观察到；可能也和MG呈正相关；但需扩大样本量进一步观察。
3.2单倍型B*15-DRB1*15与MG呈负相关。A*24-DRB1*14和A*02-B*15-DRB1*15仅出现在对照组中,MG组未观察到此2种单倍型,可能也呈负相关。