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目的:微小RNAs（Micro RNAs,miRNAs）参与了多种肿瘤类型的综合生物学过程。本课题组的前期研究中发现人类（Homo sapiens,hsa）-micro RNA（miR）-28-5p在弥漫大B细胞淋巴瘤（Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL）组织中表达下调,而酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白zeta（14-3-3ζ或YWHAZ）表达上调。通过生物信息学分析,预测YWHAZ基因是hsa-miR-28-5p的靶基因。通过本研究拟探索hsa-miR-28-5p/YWHAZ轴在DLBCL中的作用机制及药物敏感性。方法:1)应用q RT-PCR技术验证hsa-miR-28-5p及YWHAZ在DLBCL新鲜组织中的表达水平;应用免疫组化检测DLBCL患者石蜡包埋组织中的YWHAZ及PI3K/AKT信号通路相关其余差异蛋白的表达水平,通过回顾性分析DLBCL的流行病学特点和临床特征,观察DLBCL的形态学特征,结合免疫组织化学结果,分析DLBCL的不同免疫分型的临床病理特征,分析DLBCL组织中PI3K/AKT信号通路相关差异蛋白YWHAZ、AKT、p-AKT、BAD、BAX、BCL-2的表达水平及YWHAZ与其余差异蛋白之间的相关性,分析DLBCL患者临床病理特征与PI3K/AKT信号通路相关差异蛋白的表达水平之间的相关性,通过生存分析了解上述差异蛋白的表达水平与DLBCL预后之间的相关性;2)应用双荧光素酶报告基因检测YWHAZ与hsa-miR-28-5p的互相作用的关系;应用q RT-PCR技术检测DLBCL细胞和正常人外周血B淋巴细胞中hsa-miR-28-5p及其靶基因YWHAZ的表达,确定最终进行实验的细胞株;通过瞬时转染hsa-miR-28-5p模拟物（mimic）、hsa-miR-28-5p抑制剂（inhibitor）、siRNA-YWHAZ、siRNA-YWHAZ+hsa-miR-28-5p inhibitor至DLBCL细胞,分别观察hsa-miR-28-5p inhibitor、hsa-miR-28-5p mimic、siRNA-YWHAZ、siRNA-YWHAZ+hsa-miR-28-5p inhibitor对DLBCL细胞生物学行为的影响,并设立相应的对照,分别应用CCK-8法、Annexin V-PE/7-AAD双染法、PI染色法检测细胞增殖、凋亡及周期,同时应用q RT-PCR和免疫印迹试验（Western Blot）检测在不同表达模式下YWHAZ、BAX、BAD、BCL-2的基因和蛋白表达水平;3)本研究分别使用不同浓度的阿霉素（多柔比星,Doxorubicin）干预DLBCL细胞,CCK-8实验检测DLBCL细胞增殖以摸索Doxorubicin的最佳浓度;转染hsa-miR-28-5p mimic NC和转染hsa-miR-28-5p mimic至Doxorubicin干预的DLBCL细胞组,设立空白对照,分别在DLBCL细胞培养后的不同的干预时间观察各组hsa-miR-28-5p对Doxorubicin敏感性的影响;分别转染hsa-miR-28-5p mimic NC和hsa-miR-28-5p mimic至Doxorubicin干预的DLBCL细胞组,设立空白对照,24小时后,分别在各实验组添加不同浓度的Doxorubicin,继续培养24小时,观察在不同的干预浓度下各组DLBCL细胞中hsa-miR-28-5p对Doxorubicin敏感性的影响;应用软琼脂克隆形成实验、流式细胞仪检测线粒体膜电位和Caspase-3活性检测以了解DLBCL细胞的增殖水平、早期凋亡及晚期凋亡的水平;应用流式细胞术Annexin V-PE/7-AAD、PI/RNase Staining Buffer法分别检测DLBCL细胞的凋亡、周期。结果:1)本研究在组织水平证实hsa-miR-28-5p在DLBCL组织中表达下调,YWHAZ在DLBCL组织中表达上调;hsa-miR-28-5p与YWHAZ呈负相关（r=-0.377,P=0.040）,YWHAZ与BAD呈负相关（r=-0.177,P=0.036）,与BCL-2呈现正相关（r=0.180,P=0.033）;采取综合治疗的DLBCL患者的总体生存率（Overall Survival rate,OS）比单纯手术切除或单纯化疗的OS长,年龄调整的国际预后指数（Age adjusted International Prognostic Index,aa IPI）评分＞2分、合并系统性疾病、LDH升高、YWHAZ阳性表达是DLBCL患者OS的独立预后危险因素;BAX的阳性表达是DLBCL患者OS的独立预后保护因素。2)本研究在细胞水平证实YWHAZ是hsa-miR-28-5p的靶基因;YWHAZ在DLBCL中是癌基因,沉默YWHAZ的表达能抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、导致细胞周期阻滞在S期,可出现DLBCL细胞DNA合成受阻,DLBCL细胞在S期与G2/M期、G0/G1期之间的转换被调控;hsa-miR-28-5p在DLBCL中是肿瘤抑制因子,hsa-miR-28-5p的过表达可以抑制细胞增殖、促进凋亡、导致周期阻滞在S期;相反,hsa-miR-28-5p的低表达可促进DLBCL细胞的增殖、抑制其发生凋亡,能逆转hsa-miR-28-5p的过表达对DLBCL细胞周期的调控作用;hsa-miR-28-5p inhibitor可部分性的逆转siRNA-YWHAZ对DLBCL细胞的抑制增殖、促进凋亡和阻滞DLBCL细胞周期的作用;hsa-miR-28-5p通过靶向YWHAZ来影响DLBCL细胞的增殖、凋亡和周期;3)本研究继续在细胞水平证实Doxorubicin抑制DLBCL细胞的最佳浓度为3.028μmol/l,且对DLBCL细胞的作用有浓度依赖性和时间依赖性;hsa-miR-28-5p mimic+Doxorubicin组可明显降低DLBCL细胞的增殖能力,DLBCL细胞凋亡比率亦以hsa-miR-28-5p mimic+Doxorubicin组最高,进一步证实hsa-miR-28-5p过表达联合Doxorubicin可在促进肿瘤细胞凋亡时获得最佳疗效;hsa-miR-28-5p mimic+Doxorubicin干预DLBCL细胞后,细胞周期被阻滞在S期,DNA合成受阻,hsa-miR-28-5p mimic+Doxorubicin可调控DLBCL细胞的周期。提示hsa-miR-28-5p的过表达联合Doxorubicin可通过影响DLBCL细胞的增殖、凋亡、周期而参与DLBCL的发生发展。结论:应用q RT-PCR技术证实hsa-miR-28-5p在DLBCL组织中表达下调,而YWHAZ在DLBCL组织中表达上调,生存分析发现采取综合治疗的DLBCL患者的OS比单纯手术切除或单纯化疗的OS长,YWHAZ阳性表达是DLBCL患者OS的独立预后危险因素;在DLBCL中,YWHAZ是hsa-miR-28-5p的靶基因,hsa-miR-28-5p在DLBCL细胞中可能抑制肿瘤生长,YWHAZ可能是癌基因,hsa-miR-28-5p通过靶向YWHAZ来参与调控DLBCL细胞的增殖、凋亡和周期;Doxorubicin对DLBCL细胞的作用有浓度依赖性和时间依赖性;hsa-miR-28-5p的过表达可能增强DLBCL细胞对Doxorubicin的敏感性,从而提高DLBCL的治疗效果。