山银花为灰毡毛忍冬Loncera macranthoides Had.-Mazz.,红腺忍冬Lonicera hypolauca Miq.或华南忍冬Lonicera confusa DC.的干燥花蕾或带初开的花[1]。作为临床常用的中药,药理研究表明山银花具有抗炎、解热、保肝、止血、降血脂、抗氧化和免疫调节等作用[2]。绿原酸作为山银花的主要有效成分之一,为山银花重点质量控制指标之一,具有抗氧化、抗自由基、抗病毒等功效[3]。目前,有“第七类营养素”之称的绿原酸等多酚类物质,广泛用于医药、保健、食品、美容等行业。因此,它的开发利用有着广泛的应用前景。高纯度的绿原酸价格昂贵,是目前国际公认的“植物黄金”[4]。德国科学家Michael等对绿原酸的化学合成方法做了研究,实验室条件下,奎尼酸经四步反应得到绿原酸,总产率为65%。但是,工业化生产绿原酸的化学合成方法目前还未出现.从经济角度来看,因提取绿原酸的植物大多低廉易得,所以绿原酸的主要来源还是从天然植物中提取[5]。绿原酸类化合物属于含有羟基和邻二酚羟基的有机物。在碱性条件下,易被氧化,不稳定[6],因此,绿原酸的提取、纯化又不同于常规有机酸的提取。工业上绿原酸的提取常用水提醇沉的经典方法,但是耗醇量大、成本高、生产耗时长,且醇沉后有效成分损失严重,绿原酸得率较低,粗提取物中杂质含量多,损失也较大[7]。针对目前关于山银花水提醇沉工艺的不足,本课题在文献调研的基础上,利用绿原酸可溶于水的特性,以水为提取、分离、纯化溶剂,降低生产工艺中乙醇的消耗量,建立绿色、低耗的山银花绿原酸提取分离纯化工艺。围绕这一目标,本课题在以下几个方面进行研究:1.山银花中总有机酸(以绿原酸计)、绿原酸的含量测定山银花采自湖南省隆回县麻塘山,由湖南省林业科学院王晓明研究员鉴定为忍冬科忍冬属灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.)。以绿原酸为对照品,在324nm处,利用紫外分光光度法测定山银花中总有机酸的含量(以绿原酸计)为108(mg/g)。利用高效液相色谱法测定山银花中绿原酸的含量,为60(mg/g)。2.山银花中绿原酸水提取工艺通过比较绿原酸转移率、总有机酸百分含量等指标,采用单因素实验法筛选山银花水提取工艺。最佳提取工艺为物料比1:10,浸提温度50℃,浸提3次,每次4小时。3.水提取液中除蛋白质、鞣质工艺研究选择ZTC+1-Ⅱ絮凝剂等四种絮凝剂作考察对象,对筛选出的絮凝剂ZTC+1-Ⅱ进行单因素实验考察,利用正交实验法优选去蛋白工艺。最佳工艺:药液物料比1:10,按ZTC+1-Ⅱ中B组分:A组分(2:1)的用量加入B组分0.2mL/g(絮凝剂溶液体积/生药量),搅拌5分钟。搅拌温度30℃,搅拌速度10r/min。加入A组分0.1mL/g,静置1小时。4.山银花中水提取液除脂溶性成分的研究取除去蛋白后的水提取液,考察AB-8等四种树脂吸附绿原酸等物质的性能,筛选出AB-8树脂。最佳工艺:山银花絮凝液(1:10),流速为2BV/h,饱和吸附量138.75mg/g(干树脂),洗脱剂用量为12mL/g(干树脂)。合并树脂流出液、水洗脱液。5.山银花中水提取液中除糖类成分的研究利用聚酰胺氢键吸附的原理,将AB-8树脂去黄铜后水溶液中的绿原酸与糖类分离。最佳工艺如下:山银花AB-8树脂富集液密度(ρ=1.04),按饱和吸附量为121.29mg/g(干聚酰胺),洗脱剂用量为5mL/g,收集水洗脱液。6.绿原酸的结晶将去除糖类成分后的山银花水溶液,浓缩至浸膏,甲醇加热溶解,放冷析晶体,重结晶3次,得到绿原酸晶体,HPLC含量检测纯度。