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目的:课题组前期研究提示健脾清化方通过增加骨骼肌细胞中的4型葡萄糖转运体（Glucose Transporter Type 4,GLUT4）蛋白表达提高骨骼肌组织的葡萄糖利用,从而改善骨骼肌胰岛素抵抗。文献提示,骨骼肌脂肪异位沉积是引起骨骼肌胰岛素抵抗的重要原因,本研究主要观察中药对骨骼肌脂肪异位沉积的影响,及其可能的机制。方法:本研究分体内实验和体外实验两部分。体内实验以C57小鼠为研究对象。除正常对照组（control组）的10只以外,其余60只小鼠用高脂饲料喂养（high fat diet,HD组）8周造模。造模成功后将HD组随机分为模型组（model组）、健脾清化方组（Jian pi qing hua fang,JPQHF组）和吡格列酮组（pioglitazone,PIO组）,连续灌胃4周。第5周进行腹腔注射胰岛素耐量试验和腹腔注射糖耐量试验。第6周麻醉取血并处死小鼠,剥离腓肠肌。Elisa法检测空腹血糖和胰岛素,油红O染色骨骼肌切片观察肌内脂质,GPO-PAP法检测骨骼肌内甘油三酯含量,PCR检测成脂因子PPARγ、成肌因子myogenin基因相对表达量,western blot法检测m TOR通路m TOR及其磷酸化pser2448m TOR、胰岛素信号通路PI3K、AKT及其磷酸化pser307AKT、成脂因子PPARγ、成肌因子myogenin的蛋白相对表达量。体外实验用棕榈酸处理分化3天的c2c12细胞24小时造模,在使用或不使用胰岛素的基础上用健脾清化方含药血清干预,同时用p-m TOR抑制剂雷帕霉素平行对照。用CCK-8方法检测细胞活性。通过细胞油红O染色方法观察c2c12细胞内脂质沉积情况,western blot法检测m TOR通路m TOR、p-m TOR,胰岛素信号通路PI3K和p-AKT,成脂因子PPARγ、成肌因子myogenin蛋白相对表达量。结果:1.与control组相比,model组小鼠的糖耐量和胰岛素耐量明显下降,与model组小鼠相比,健脾清化方和吡格列酮明显减低小鼠空腹胰岛素（P＜0.01）,提高胰岛素耐量和葡糖糖耐量。2.与control组相比,model组小鼠骨骼肌内细胞脂质沉积明显升高,甘油三酯水平明显升高（P＜0.01）,与model组小鼠相比,健脾清化方明显降低骨骼肌异位脂肪沉积,油红O染色程度明显减少,甘油三酯含量明显下降（P＜0.01）。3.与control组相比,model组小鼠骨骼肌内胰岛素信号通路PI3K、p AKT蛋白相对表达量及p-AKT/AKT蛋白表达比例明显下降（P＜0.01）,与model组小鼠相比,健脾清化方和吡格列酮明显提高PI3K、p AKT蛋白相对表达量及p-AKT/AKT蛋白表达比例（P＜0.01）。4.与control组相比,model组小鼠骨骼肌成肌标志物myogenin基因和蛋白相对表达量明显下降（P＜0.01）,成脂因子PPARγ基因和蛋白相对表达量明显升高（P＜0.01）,与model组小鼠相比,健脾清化方提高myogenin基因和蛋白相对表达量（P＜0.01）,降低PPARγ基因和蛋白相对表达量（P＜0.01）。5.与control组相比,model组小鼠骨骼肌p-m TOR蛋白相对表达量和p-m TOR/m TOR蛋白表达比例明显升高（P＜0.01）,与model组相比,健脾清化方降低p-m TOR蛋白相对表达量和p-m TOR/m TOR蛋白表达比例（P＜0.01）。6.棕榈酸造模增加c2c12细胞中的脂质沉积,健脾清化方干预后脂质沉积减少。7.用胰岛素处理后,棕榈酸模型组PI3K和p-AKT蛋白相对表达量较正常组明显降低（P＜0.01）,健脾清化方干预后PI3K总蛋白和p-AKT蛋白的相对表达量较模型组显著提高（P＜0.01）。8.有胰岛素激活p-AKT时,与正常组相比,棕榈酸模型组p-m TOR蛋白相对表达量相较于正常组明显降低（P＜0.01）。9.没有胰岛素激活p-AKT时,与正常组相比,棕榈酸模型组p-m TOR、m TOR、PPARγ蛋白相对表达量相较于正常组明显升高（P＜0.01）,myogenin蛋白相对表达量明显降低（P＜0.05）。健脾清化方干预后相较于模型组p-m TOR、PPARγ蛋白相对表达量明显降低（P＜0.05）,myogenin蛋白相对表达量较模型组显著提高（P＜0.05）。结论:1.健脾清化方可减少骨骼肌细胞内脂质沉积,改善骨骼肌组织PI3K/AKT胰岛素信号通路,改善小鼠模型胰岛素抵抗。2.健脾清化方可能通过抑制过度激活的m TOR,抑制骨骼肌细胞中成脂因子表达、提高成肌因子表达,从而减少骨骼肌细胞内脂质沉积。