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研究背景:肿瘤的发生发展机制一直是医疗界难以攻破的一道难题,人们对于脑胶质瘤治疗的探索一直在前行,以往的治疗方法:手术、化疗和放疗,或者是两者结合、三者结合。但仍然有较高再发率,而完全治愈的案例鲜有报道。脑胶质瘤的发病原因可能主要是因为基因的不正常表达所导致,现如今基因的异常表达已成为研究多种疾病热点[1]。有丝分裂的异常导致了肿瘤细胞的不可控增殖,着丝粒在有丝分裂过程中有重要作用,而着丝粒蛋白又是着丝粒的重要组成部分,它们在细胞分裂过程中一同参与着丝粒的组装并影响其功能,保证分裂期染色体能够正确分离。着丝粒蛋白W(CENP-W)在发现的早期被叫做肿瘤上调蛋白2(CUG2)基因,是在2007年被新发现的一种和肿瘤发病机制相关的基因[2]。CENP-W定位于染色体6q22.32,其基因组DNA全长约8.5kb,mRNA全长约600bp,蛋白质约10kD。有相关文献报道称CENP-T、CENP-W、CENP-S和CENP-X相互结合可形成一个结构稳定的四倍体。此四倍体与DNA相结合可形成正螺旋结构,缠绕了DNA形成核小体,在有丝分离过程中有着不可或缺的作用[3]。CENP-W的高表达对肿瘤细胞的作用表现在多方面,对细胞的增殖可起到促进作用,同时对细胞的凋亡有诱导作用[4]。具体机制繁琐复杂[5]。已有相关文献报道CENP-W在大多数肿瘤中大多数呈明显高表达。但在极少数的肿瘤中,CENP-W的表达水平未见明显增高甚至表达稍有降低。然而,目前对CENP-W的研究报道较少,其对肿瘤细胞功能的影响更是未见报道,而关于下调CENP-W的表达对人脑胶质瘤细胞功能影响的相关报道至今空白。本研究的实验对象是本实验室所存细胞:神经胶质瘤U87细胞。在实验过程中,我们先将CENP-W-siRNA转染到U87细胞内,来下调CENP-W的表达,然后用多种实验方法研究CENP-W对U87细胞生物学行为的影响,以期望能为神经胶质瘤的研究贡献一份力量。研究目的:将CENP-W-siRNA转染到U87细胞内,从而下调CENP-W的表达,研究CENP-W-siRNA转染前后对U87细胞功能(增殖、侵袭、凋亡、细胞周期等)的影响。研究方法:1.前期准备工作。细胞复苏,细胞培养等。2.采用脂质体介导法将CENP-W-siRNA转染到U87细胞。转染的操作过程通过阅读转染试剂的说明书进行。转染后6h,将细胞从温箱取出,观察转染情况,若荧光细胞比例占50%以上则判断为转染成功,若荧光细胞比例低于50%则判断为转染失败,不可再继续后续实验。3.采用实时荧光定量PCR检测细胞mRNA的水平。免疫蛋白印记技术用于检测细胞蛋白的水平。4.MTT法和Brdu实验检测siRNA转染对U87细胞增殖抑制率的影响,细胞增殖能力的检测通过平板克隆实验去完成。5.实验过程中U87细胞迁移和侵袭能力通过细胞划痕测验、Transwell测验检测。6.流式细胞术用于分析CENP-W对U87细胞周期的影响。同时也用于观察细胞的凋亡,并检测凋亡细胞的比例。研究结果:MTT实验、平板克隆实验、Brdu实验显示转染CENP-W-siRNA的实验组U87细胞增殖能力、克隆形成能力较空白对照组及NC照组明显降低。Transwell实验和划痕实验发现转染实验组细胞的迁移、侵袭能力较对照组明显减弱;流式细胞术分析表明U87细胞转染CENP-W-siRNA后,它的周期被阻滞在G0/G1期,细胞增殖受限。同时CENP-W-siRNA组细胞凋亡比例较对照组增多。结论:下调CENP-W的表达可抑制脑胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭并促进细胞的凋亡。从而可以在一定程度上说明CENP-W可能对脑胶质瘤的发生发展起一定作用。