论文部分内容阅读
乳酸菌是重要的一类益生菌,主要通过在肠道中的定植,发挥拮抗、营养和免疫等益生作用。乳酸菌常被添加到乳制品中,以改善乳品风味,帮助宿主拮抗致病菌,维持肠道健康,从而达到预防疾病的目的。作为来源于母乳的乳酸菌,植物乳杆菌WLPL04的生物学特性研究是其应用开发的前提基础。本文对植物乳杆菌WLPL04进行了耐受能力(耐酸、耐胆盐、耐受胃肠道和抗生素敏感性)和益生性能(胞外多糖产量、抑制致病菌能力、抑制致病菌黏附肠上皮细胞Caco-2、抗炎症作用以及调节肠道菌群)的研究。结果表明,植物乳杆菌WLPL04在pH 2.5 MRS中能存活6 h,在含0.45%胆盐MRS中能存活24 h,提示其能耐受胃肠道中酸性和胆盐的胁迫。WLPL04对8种抗生素(红霉素、呋喃妥因、四环素、氯霉素、阿莫西林、青霉素、链霉素和庆大霉素)敏感,耐受6种抗生素(利福平、卡那霉素、杆菌肽、多粘菌素、环丙沙星、萘啶酮酸)。植物乳杆菌WLPL04能够抑制革兰氏阳性菌(如单增李斯特、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌)以及革兰氏阴性菌(如铜绿假单胞杆菌、宋氏志贺菌、阪崎肠杆菌、鼠伤寒沙门杆菌和大肠杆菌)。植物乳杆菌WLPL04生长24 h后的胞外多糖产量高达426.73±65.56 mg/L。在抑制致病菌对肠上皮细胞黏附实验中,采用了竞争、排斥和置换三种方式,结果显示:竞争方式中,WLPL04对大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌抑制率分别为35.51%,8.10%和40.30%;排斥方式中,WLPL04对大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌抑制率分别为59.80%,62.50%和42.60%;置换方式中,WLPL04对大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌抑制率分别为75.23%,39.97%和52.88%。体外免疫实验中,植物乳杆菌能够减弱由SDS引起的Caco-2细胞的炎症,同时显著性地降低由鼠伤寒沙门氏菌引起的IL-6,IL-8和TNF-α基因的上调,同时增加IL-10的表达量(p<0.01)。为了探究植物乳杆菌WLPL04对小鼠的影响,本文采用BALB/c小鼠为动物模型,通过小鼠体重、脏器指数指标来考察WLPL04的作用效果,并使用Real-time PCR方法检测WLPL04对小鼠肠道菌群的调节作用。结果显示,WLPL04灌胃7天后,小鼠空肠、结肠和粪便中双歧杆菌的含量显著性增加,肠球菌显著下降(p<0.05);灌胃14天后,小鼠粪便中乳杆菌含量明显增加,肠球菌、肠杆菌及拟杆菌数量明显减少;灌胃实验结束后第2天和第7天,实验组小鼠肠道中乳杆菌数量有所下降,但仍然高于对照组。综上所述,植物乳杆菌WLPL04能够体外抑制病原菌的生长,菌体在胃肠道中生存情况良好,能够抑制致病菌对肠上皮细胞的黏附及致病菌引起的炎症反应;同时能选择性促进或抑制肠道微生物的生长,有效调节肠道菌群,提高肠道中有益菌群的含量,且灌胃WLPL04对机体免疫器官没有影响,不会引起体内的炎症反应。因此,本论文为植物乳杆菌WLPL04的开发研究提供了基础数据及应用参考。