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目的:用功能化PD-1 EVs作为药物递送载体,将OA靶向系统递送至肿瘤组织中,并同时实现PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂疗法与溶瘤病毒疗法的联合治疗,提高抗肿瘤效果。方法:1.采用慢病毒转染的方法,构建稳定表达PD-1蛋白的稳转细胞株,用免疫荧光、WB等方法验证稳转细胞株的成功构建和PD-1 EVs的成功提取。2.用TEM、DLS、纳米流式的方法验证OA@PD-1 EVs纳米粒子的成功合成。3.用WB和q-PCR检测OA感染肿瘤细胞前后,PD-L1的表达情况。4.用荧光染料标记EVs,通过激光共聚焦、流式细胞仪和活体荧光成像的方法,分别在体内体外验证PD-1 EVs对肿瘤的靶向效果。5.构建Hep1-6荷瘤鼠,尾静脉注射PD-1 EVs、OA、OA@PD-1 EVs,通过监测肿瘤体积大小变化验证OA@PD-1 EVs抗肿瘤效果;并通过监测小鼠体重变化、肝肾功能主要指标水平变化、主要脏器的H&E染色比较,对OA@PD-1 EVs的生物安全性进行初步评价。结果:1.成功构建稳定表达PD-1的稳转细胞株,并成功提取PD-1 EVs。2.OA@PD-1 EVs纳米粒子成功合成,其粒径大小稳定在200nm左右。3.WB和q-PCR的结果表明肿瘤细胞上PD-L1的表达在OA感染之后上调。4.体内体外实验证实PD-1 EVs在肿瘤部位富集,且靶向性在OA感染肿瘤细胞后增强。5.与PBS组相比,单独接受PD-1 EVs和OA治疗的组别,肿瘤部位出现不同程度的坏死,接受OA@PD-1 EVs的治疗组,肿瘤的生长被明显抑制,且有消退现象。在治疗过程中,所有组别小鼠体重波动不大,肝肾功能主要指标水平无明显差异,主要器官H&E染色结果显示无明显异常,证明纳米材料具有较好的生物安全性。结论:本课题成功构建了具有靶向肿瘤功能与类PD-L1抗体功能于一体的双功能胞外囊泡PD-1 EVs,成功装载OA,将OA靶向系统递送至肿瘤部位,实现了PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂疗法与溶瘤病毒疗法对肿瘤的联合治疗,提高了抗肿瘤效果。而且,PD-1 EVs的靶向性在OA感染肿瘤细胞后得到增强,因此随着治疗的进行,PD-1 EVs会将更多的OA递送至肿瘤部位,进一步提高了抗肿瘤效果。