鸭病毒性肝炎病毒的分离鉴定及ELISA检测抗体方法的建立

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鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis,DVH)是6周龄以下雏鸭的一种传播迅速、高度致死、肝肿大出血为主要特征的病毒性疾病,病原为鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)。该病在国内雏鸭群中频频发生,给养禽业生产造成了极大的损失。本实验从一群发病鸭的病料中分离到一株鸭肝炎病毒,并建立了检测鸭肝炎病毒抗体的ELISA快速检测方法,取得了如下结果:1.鸭病毒性肝炎病毒株的分离鉴定对河南省内疑似鸭病毒性肝炎感染鸭病料的收集,通过细菌分离、病毒分离、中和试验、动物回归试验、雏鸭保护试验以及病毒对红细胞的凝集试验,分离到一株鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒株,并对病毒进行了初步鉴定,该病毒的鸡胚半数致死量(ELD50)为0.2ml 10-7. 659稀释的病毒液,中和试验结果表明将血清作1:75倍稀释可保护50%的鸡胚免于死亡。2.鸭抗DHV血清的制备及鸭传染性肝炎血清抗体ELISA快速检测方法的建立通过对鸭病毒性肝炎病毒种毒的处理和鸭的多次免疫,制备了鸭抗DHV血清。将通过鸭胚传代的病毒经过纯化后,作为包被抗原,建立了一种检测血清中DHV抗体的间接ELISA方法。通过对方法学的研究,确定了ELISA反应的各组分的最适工作条件,确定抗原最佳包被浓度为7.5μg,血清最佳稀释度约为1:320,阳性血清OD450值(P)接近1.0,阴性血清值(N)为0.125,P/N值最大。阴性和阳性分界明显;通过对40份阴性鸭血清的检测结果,确定阴阳性临界点为0.2。根据建立的ELISA方法及最佳反应条件,确定力方法的敏感性和特异性。结果表明,本试验建立的间接-ELISA法可用于鸭血清中鸭肝炎病毒抗体水平的检测。
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