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酒精广泛应用于生物质能源、工业、医药及食品等行业,我国虽然酒精发酵的历史悠久,但酒精生产技术仍然落后于美国、巴西等先进国家。为了提高酒精的产量和设备利用率、降低酒精的生产成本,优良的酿酒酵母是关键,同时在发酵工艺中,SSF法因工序简洁、节约能源、发酵周期短,成为现今酒精发酵工业的趋势。本文对酿酒酵母工程菌267#进行酒精发酵研究。首先对其生长特性、发酵性能、耐受性进行研究,并通过次碘酸钠方法测定267#培养后菌液的产糖化酶能力。同时采用单因素法确定267#高密度培养的最适条件,在单因素优化结果的基础上对比了三种补加葡萄糖方式对菌种密度的影响。以精制玉米粉为发酵原料,进行菌株267#SSF酒精发酵,运用Plackett-Burman设计和响应面分析相结合的方法,确定最佳产酒精发酵条件。实验结果表明发酵初始糖浓度24%,菌种的产酒精能力能够达到14.5%左右。同时菌种可耐受葡萄糖45g/100mL、乙醇24%、pH2.5、NaCl2120g/L,产糖化酶能力为0.432U/mL。菌株高密度培养的最适条件为葡萄糖4g/100mL,甘氨酸0.1g/100mL,摇床100r/min,三种补糖试验中,一次补糖方法对267#的高密度培养最为有利,活菌数目达到2.4×108CFU/mL,是优化前的3.7倍。单因素结合响应面分析法确定菌株267#SSF酒精发酵的最适条件为温度34℃、发酵时间66 h、培养基料水比 0.51、尿素 0.59g/100mL、接种量 13.07%、MgS040.033g/100mL、KH2P040.023g/100mL、CaCl2 0.013g/100mL、pH5.5、糖化酶 103U/g,所产酒精浓度达最大值14.06mL/100mL,比优化前所产酒精浓度提高了 22.47%。如将此菌株用于工业酒精发酵中,可大幅节约糖化酶成本。