核桃(Juglans regis L.)SSR开发及其应用

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核桃(Juglans regia L.)是一种重要的经济、生态林木树种。本研究利用核桃转录组数据进行EST-SSR标记的开发,以7个核桃栽培品种和‘青林’与‘元林’杂交的F1代群体,分别对构建核桃指纹图谱和抗核桃炭疽病基因的SSR标记进行了研究。研究成果如下:1,从核桃转录组数据库中随机抽取9613条Unigene序列,共16.96Mb。利用SSRHunter软件搜索其中的EST-SSR位点,共得到含有EST-SSR位点的Unigene序列1641条,EST-SSR位点1829个,每9.27kb就出现一个EST-SSR位点。其中二核苷酸重复单元占总SSR的83.67%,其次是三核苷酸重复,占11.15%,六核苷酸重复最少,占0.30%。在所有重复类型中,AG/CT是优势重复类型,占总重复类型的62.32%,其次是AT/AT。随机选择各种不同重复类型共101对EST-SSR引物进行合成,筛选获得多态性较高的SSR引物7对。  2,采用SSR标记构建出了7个核桃品种特有的指纹图谱,为建立核桃指纹鉴定数据库提供科学依据。从10对引物中筛选出WGR69,WGR281,WGR367,3对核心引物,即通过这3对引物即可区分出7个核桃品种,其中用2对引物就可区分出6个核桃品种。  3,采用10对不同来源的SSR标记分析7个核桃品种的遗传多样性。聚类分析把7个核桃品种分为3个类群。‘瑞嘉’和‘瑞秀’聚为一个类群,‘辽核1号’、‘元丰’和‘元林’3个品种聚为一个类群,‘香玲’和‘青林’聚为一个类群,与另外两个类群亲缘关系较远。  4,以‘青林’、‘元林’以及‘青林’ב元林’F1代为试材,使用SSR标记,通过BSA法检测核桃抗炭疽病抗性基因位点。研究使用了194对核桃SSR引物,对87份试材进行检验,其中在双亲中有差异条带的引物有58对,在抗、感池中有差异的引物有2对,最终筛出一对引物与炭疽病抗性基因相关联。将SSR标记转化为更稳定无非特异性扩增的SCAR标记。
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