论文部分内容阅读
第一部分芍药苷对脓毒症小鼠死亡率的影响目的:观察芍药苷对脓毒症小鼠死亡率的影响及可能的药理机制方法:1.1不同剂量芍药苷(Pae)对脓毒症小鼠死亡率的影响利用SPF级体重在30-35g之间的雄性昆明小鼠为实验对象,通过经典盲肠结扎穿孔术的方法建立小鼠脓毒症模型,60只小鼠随机分为①假手术组(Sham组)+蒸馏水组;②CLP+蒸馏水组;③CLP+芍药苷(10mg/kg)组;④CLP+芍药苷(20mg/kg);⑤CLP+芍药苷(40mg/kg);⑥CLP+芍药苷(80mg/kg),每组10只。Sham组与CLP对照组于术后4小时及术后连续3天用蒸馏水按0.1ml/10g灌胃,不同剂量的芍药苷组分别于术后4小时及术后3天按相应剂量灌胃给药。观察10天内各组小鼠死亡率的情况,选出本实验条件下合适的芍药苷剂量。1.2不同剂量A1腺苷受体特异性阻断剂(DPCPX)对脓毒症小鼠死亡率的影响实验小鼠按以下分组①CLP+NS组;②CLP+DMSO(以50%的二甲基亚砜作为DPCPX的药物溶剂)组;③CLP+DPCPX(1 mg/kg);④CLP+DPCPX(2mg/kg);⑤CLP+DPCPX(4 mg/kg);NS及DMSO对照组于CLP术前30 min及术后3.5 h按0.1 ml/10 g皮下注射生理盐水或50%DMSO,实验组于CLP术前30min及术后3.5h按相应剂量皮下注射DPCPX。观察10天内各组小鼠死亡率的情况,选出本实验条件下合适的DPCPX剂量。1.3使用DPCPX(1 mg/kg)阻断A1腺苷受体作用后,观察Pae(20 mg/kg)对脓毒症小鼠死亡率的影响实验小鼠分组如下:①CLP+DMSO+H2O;②CLP+DMSO+Pae;③CLP+DPCPX+H2O;④CLP+DPCPX+Pae。DPCPX实验组小鼠于术前30min、术后3.5h及术后连续3d经背部皮下按1mg/kg剂量给予DPCPX;DMSO对照组于术前30min、术后3.5h及术后连续3d经背部皮下按0.1ml/10g皮下给药;Pae组于术后4h及术后3d按20mg/kg剂量灌胃给药,蒸馏水对照组于术后4h及术后3d按0.1ml/10g灌胃。观察10天内各组小鼠死亡率的情况,统计分析组间小鼠死亡率差异。结果:1.20mg/kg的剂量治疗组的脓毒症小鼠的死亡率为10%,平均生存时间为:9.1±2.8天,明显高于其他剂量组(P<0.05)。该剂量能够明显改善小鼠脓毒症症状从而降低小鼠的死亡率。2.1mg/kg剂量的DPCPX组的小鼠死亡率为55%,平均生存时间为:5.7±1.2天,高于4mg/kg剂量2.6±0.67天(P<0.05),与2mg/kg剂量组(5.9±1.2天)无统计学差异(P>0.05)。3.使用1mg/kg剂量的DPCPX阻断A1R作用后,CLP+DPCPX+H2O组10天生存率为17%,平均存活时间为2.8±1.0天,明显低于CLP+DMSO+H2O组(6.7±1.1天)(P<0.05);CLP+DPCPX+Pae组(4.09±1.13天)明显低于CLP+DMSO+Pae组(平均存活时间:9.1±0.78天)(P<0.05)。此剂量DPCPX能够加重脓毒症小鼠症状,并且显著抑制Pae对脓毒症小鼠的治疗作用。小结:1.20mg/kg的剂量的Pae经灌胃给药能显著降低脓毒症小鼠的死亡率。2.Pae可通过腺苷A1受体发挥其降低脓毒症小鼠死亡率的作用。第二部分应用A1腺苷受体抑制剂阻断A1R的作用后芍药苷对脓毒症小鼠器官功能的影响目的:在死亡率的前提下进一步探讨芍药苷对脓毒症小鼠各器官功能的影响。方法:实验造模分组如下①CLP+DMSO+H2O;②CLP+DMSO+Pae;③CLP+DPCPX+H2O;④CLP+DPCPX+Pae;⑤Sham+DMSO+H2O;⑥Sham+DMSO+Pae;⑦Sham+DPCPX+H2O;⑧Sham+DPCPX+Pae。Pae、DPCPX在假手术组及CLP组给药方式、时间同前。多次分批造模于术后12h、24h采血取材,收集血清样品由于测定血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿素氮(BUN)和肌酐(CR)的水平。结果:1.术后12h,CLP各组小鼠CR、BUN、ALT、AST水平均高于假手术组(P<0.05),CLP+DMSO+Pae组CR、BUN值低于CLP+DMSO+H2O组(P<0.05)。CLP+DPCPX+H2O组AST高于CLP+DMSO+H2O组(P<0.05)。2.术后24h,各组小鼠CR、BUN无统计学差异(P<0.05);CLP+DMSO+Pae组AST低与CLP+DMSO+H2O组(P<0.05),CLP+H2O+DPCPX组ALT、AST高于CLP+DMSO+H2O组(P<0.05)。小结:Pae具有减轻脓毒症小鼠肝、肾组织器官功能损害的作用,应用腺苷A1受体抑制剂DPCPX后该保护作用被阻断。第三部分芍药苷通过A1腺苷受体对脓毒症小鼠心功能的保护作用目的:观察芍药苷通过A1腺苷受体对脓毒症小鼠心功能的保护作用。方法:实验造模分组及给药方式均同第二部分,在造模12h、24h后用小动物超声系统,测定小鼠心率(HR)、每博输出量(SV)、心输出量(CO)、左心室射血分数(LVEF%)、短轴缩短率(FS%)、二尖瓣环舒张早期峰值速度(E)与舒张晚期峰值速度(A)比值(E/A)。在造模24h后,取心脏组织匀浆后测定心肌组织中LDH水平。结果:脓毒症小鼠在CLP术后12h、24h可表现出SV、CO、E/A比值下降的心功能收缩和舒张障碍,其中CLP+DMSO+Pae组SV、CO、E/A比值均高于其他模型组(P<0.05);LDH结果显示:CLP+DMSO+H2O组LDH活性较Sham+DMSO+H2O组升高(P<0.05);CLP+DPCPX+H2O组则较CLP+DMSO+H2O组升高(P<0.05);CLP+DMSO+Pae组LDH活性显著低于其他CLP模型组(P<0.05)。小结:芍药苷能通过激活腺苷A1受体减轻脓毒症小鼠心肌细胞损伤,改善其心肌收缩及舒张功能。第四部分芍药苷通过A1腺苷受体对脓毒症小鼠心功能的保护作用的机制目的:探讨芍药苷通过A1腺苷受体对脓毒症小鼠心功能的保护作用的机制。方法:实验造模分组及给药方式均同第二部分,在造模24h后,取心脏组织匀浆后测定心肌组织中SOD水平及MDA的含量。结果:CLP+DMSO+H2O组SOD活性低于Sham组(P<0.05),CLP+DMSO+Pae组SOD活性高于其他模型组(P<0.05);CLP+DMSO+H2O组MDA水平高于Sham组(P<0.05),CLP+DMSO+Pae组MDA水平则显著低于其他模型组(P<0.05)。Sham组各组之间SOD活性与MDA水平均无统计学差异(P>0.05)。小结:芍药苷通过干预心肌组织氧自由基代谢,增强SOD活性,增强清除自由基能力,提高抗氧化机制,降低心肌组织脂质过氧化损伤发挥心功能保护的作用。