论文部分内容阅读
目的：哮喘是一种严重影响人类身体健康,威胁人类生命安全的常见病多发病,近年来研究发现子宫珠蛋白相关蛋白1 (UGRP1)与哮喘的发病密切相关,但UGRP1及其mRNA在哮喘小鼠不同时间段的变化规律及地塞米松对其的影响,目前的研究还有争议。本实验通过连续动态时间点(6h、24h)观察UGRP1及其基因在哮喘小鼠肺组织的表达及地塞米松对其的影响,进一步揭示了UGRP1在哮喘发病中的作用机制,从而为阐明哮喘的发病机理,探索哮喘治疗的新途径提供理论依据。方法：将36只小鼠随机分为哮喘模型组(A)、地塞米松干预组(D)、空白对照组(K)。哮喘模型组：每只小鼠在第1天和第8天腹腔注射抗原混悬液(鸡卵清蛋白OVA50μg,氢氧化铝2mg,生理盐水0.2ml)致敏,第14天开始乙醚麻醉后滴鼻激发,每只小鼠每次滴入100ul OVA溶液(含20ug OVA)连续7天。地塞米松干预组：致敏同哮喘模型组,在激发前30分钟腹腔注射地塞米松溶液0.2ml(3mg/kg)。空白对照组(K)：第1天和第8天腹腔注射抗原混悬液,乙醚麻醉后滴鼻100ul生理盐水。之后分别于末次激发后6小时和24小时处死各一半小鼠。切取肺组织,采用HE染色评估组织的一般形态和细胞浸润情况,用实时荧光定量PCR法分别检测小鼠肺组织UGRP1和β-actin的mRNA含量：以SYBR-green I作荧光指示剂,检测UGRP1与管家基因β-actin扩增的CT值,用△△Ct法计算标本的UGRP1基因在mRNA水平上的相对表达量,并用酶联免疫夹心法(ELISA)测肺泡灌洗液(BALF)中UGRP1水平。各组数据均用x+s表示,用SPSS13软件统计处理数据,同时间段不同组间行单因素方差分析和同模型组不同时间段行两个随机样本的·t检验,P<0.05者为差异具有显著性。结果：(1)肺病理组织学检测：哮喘组小鼠肺组织,肉眼可见充血、切面湿润；HE染色镜下可见小气道及小血管周围有明显炎细胞浸润,肺泡腔可见嗜酸性粒细胞,肺泡间隔断裂,肺泡腔及肺间质可见溢出红细胞。地塞米松干预组炎细胞和渗出物较少,有明显的炎症吸收。对照组未见上述现象。(2)肺组织UGRP1mRNA的表达：在末次激发后6小时处死的哮喘组及地塞米松干预组间UGRP1mRNA量无明显差异(P>0.05),但均显著低于空白对照组(P<0.05)；在24小时处死的哮喘组,地塞米松干预组和空白对照组间肺组织UGRP1mRNA含量两两间有明显差异(P<0.05),空白对照组表达最高,哮喘组最低。(3)肺泡灌洗液(BALF)中UGRP1的含量：6小时处死批BALF中UGRP1的量,地米干预组和哮喘模型组无明显差异(P>0.05),空白对照组含量最高；24小时处死批地米干预组和空白对照组无明显差异,哮喘组含量最低；地米干预组BALF中UGRP1量较6小时组的有明显升高(P<0.05),哮喘组降低,空白对照组无明显差异(P>0.05)。结论：哮喘组小鼠肺组织UGRP1及其基因含量无论在6小时组还是24小时组均较空白对照组明显降低,地塞米松能促进肺组织UGRP1转录、维持BALF中UGRP1的稳定、提高其含量,从而抑制肺部炎症反应。