肾细胞癌(RCC)是肾脏最常见的恶性肿瘤,占成人全部恶性肿瘤的2%至3%,每年全世界约有10万人死于RCC。随着影像学技术的发展,一些早期诊断的患者可以通过手术治愈。然而约20%-40%的患者在手术后仍会复发或远处转移,而且许多患者在首次诊断时疾病已经处于晚期。晚期肿瘤患者预后很差,虽然一些靶向药物的使用可以增加部分患者的生存获益,但是靶向药物耐药的情况几乎不可避免。这使得RCC仍然是一个全球性的难治性的疾病。因此,探究RCC发生发展的具体机制,寻找疾病转移和耐药的有效靶点对RCC的综合治疗具有深远意义。IncRNA是一类由长度超过200个核苷酸组成的RNA,在基因转录、翻译、转录后调控和翻译后修饰中起重要作用。鉴于IncRNA表达的组织特异性,一些特定的IncRNA可以作为肿瘤诊断、进展以及对治疗反应的有效指标。最近,大量证据表明IncRNA的异常表达与RCC的发生密切相关。HOTTIP是位于HOXA簇5’末端的一个IncRNA,在许多肿瘤如舌鳞状细胞癌,肺癌,胰腺癌,肝细胞癌,骨肉瘤,胃癌等肿瘤中高表达。在这些肿瘤中,HOTTIP可能作为潜在的致癌基因,并且是患者不良预后的预测因素。然而到目前为止,HOTTIP在RCC中的表达和作用机制仍不明确。本课题旨在探讨HOTTIP在RCC中的表达和作用,寻找HOTTIP影响RCC生物学行为和对靶向药物舒尼替尼耐药的具体机制。通过本课题的研究,我们期望发现RCC发生发展过程中新的分子靶点,能够更好地预测RCC患者的预后,指导分子靶向药物的选择并探索耐药后的的解决方案。第一部分HOTTIP在RCC中的表达及作用目的:探讨HOTTIP在RCC细胞系和组织中的表达水平及与临床病理学指标和患者预后的关系,分析HOTTIP表达水平对RCC细胞增殖、克隆形成、细胞周期、迁移侵袭、裸鼠皮下成瘤能力的影响。方法:应用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测RCC组织和配对的癌旁组织中HOTTIP的表达水平,统计分析HOTTIP表达水平与临床病理指标及预后的关系。利用慢病毒在RCC细胞系Caki-1和Caki-2中构建HOTTIP干扰和过表达模型,利用CCK-8实验、平板克隆实验、流式细胞周期检测和Transwell侵袭迁移实验,在体外水平探索HOTTIP对RCC细胞生物学行为的影响。此外,利用裸鼠皮下成瘤实验分析HOTTIP在体内水平对RCC发生发展的影响。结果:qRT-PCR结果显示HOTTIP在RCC细胞和组织中显著高表达。相比于HOTTIP低表达的患者,HOTTIP高表达的患者肿瘤分期分级更高,远处转移发生率更高,总体生存率更低。与阴性对照组相比,HOTTIP过表达细胞的增殖、克隆形成能力明显增强,细胞周期G0/G1期比例降低,侵袭迁移能力显著增强,而敲低HOTTIP表达的结果相反。裸鼠成瘤实验显示敲低HOTTIP后肿瘤生长缓慢,最终体积与重量均低于对照组。结论:HOTTIP在RCC中表达明显增加,HOTTIP高表达水平与RCC更高的分期分级、远处转移和不良预后正相关。体内外实验显示HOTTIP能够增加RCC细胞的增殖、侵袭迁移以及皮下成瘤能力。第二部分HOTTIP调控c-Met通路对RCC生物学功能及对舒尼替尼耐药的影响目的:探索HOTTIP对RCC生物学功能影响以及对舒尼替尼耐药的具体机制。方法:利用慢病毒在RCC细胞系Caki-1和Caki-2中构建HOTTIP干扰和过表达模型,运用Western blot检测c-Met通路上关键分子的表达水平,在HOTTIP过表达的Caki-1和Caki-2细胞中加入c-Met抑制剂SU11274,检测细胞增殖、克隆形成、侵袭转移能力的变化。应用CCK-8方法检测HOTTIP干扰及过表达的肾癌细胞对不同浓度舒尼替尼的反应,同时检测加入c-Met抑制剂SU11274后细胞对舒尼替尼耐药的变化。结果:与对照组相比,HOTTIP干扰的细胞中c-Met、p-c-Met、p-PI3K和p-AKT表达水平显著降低,而HOTTIP过表达组中上述指标均明显升高。HOTTIP过表达的细胞中加入c-Met抑制剂SU11274后,细胞的增殖、克隆形成以及侵袭迁移能力显著降低。耐药试验中,HOTTIP干扰组细胞对舒尼替尼的耐药性降低,而HOTTIP过表达组舒尼替尼耐药性增加。加入c-Met抑制剂后,HOTTIP干扰组和过表达组细胞对舒尼替尼的反应无显著差异。结论:HOTTIP通过调控c-Met通路在RCC的增殖、克隆形成及侵袭迁移中发挥着重要作用。此外,HOTTIP可通过激活c-Met通路促进RCC细胞对舒尼替尼产生耐药性,抑制c-Met通路则可逆转细胞的耐药性。