论文部分内容阅读
目的:利用生物信息学及报告基因载体分析方法对STGC3基因启动子区进行预测及活性检测,初步鉴定STGC3基因的启动子区域,为阐明STGC3基因的表达调控机制提供重要的依据。方法:根据STGC3基因的前期研究结果,利用多种生物信息学软件对STGC3基因5’端上游调控区-3046bp至-46bp区域的3000bp序列进行启动子预测,把预测和分析得到的STGC3基因可能的启动子片段构建至萤火虫荧光素酶报告基因pGL3-enhance载体上,然后将重组体转染到人胚肾上皮细胞系293T、人鼻咽癌细胞系CNE2及永生化人鼻咽上皮细胞系NP69,并利用双荧光素酶检测试剂盒检测重组质粒的活性以初步鉴定STGC3基因的启动子区域。结果:生物信息学分析结果显示-3046bp至-46bp区域的转录起始位点有两个,一个在-2348bp处,另一个在-948bp处,而且此区域存在两个CpG岛,CpG岛1位于-1805bp至-1705bp处,长度为101bp; CpG岛2位于-900bp至-684bp处,长度为217bp。该区域未检测到经典的TATA盒序列,-1140bp和-774bp处有GC盒信号,-441bp处有CAAT盒信号。STGC3基因启动子区分值0.8以上的区域位于-2992bp至-69bp,且-845bp至-795bp区域启动子分值最高达到1.0。实验结果显示pGL3-en283、pGL3-en281、 pGL3-en571质粒在NP69、293T和CNE2三种细胞中相对于阴性对照pGL3-enhance质粒均有较强的启动子活性,其中pGL3-en281质粒在三种细胞中的启动子活性最强,故-934bp至-653bp区域有可能是其核心启动子区,而且可能在-653bp至+72bp的DNA序列中含有负性调控元件,而三种质粒在293T细胞中比其在CNE2细胞中的启动子活性强,可能在CNE2细胞中存在影响启动子活性的因素。结论:(1) STGC3基因启动子区位于-2992bp至-69bp区域,而-934bp至-653bp区域有可能是其核心启动子区。(2)在-653bp至+72bp的DNA序列中可能存在负性调控元件,在CNE2细胞中可能存在影响启动子活性的因素。