【摘 要】
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目的 建立稳定表达绿色荧光蛋白的胚胎干细胞亚系ES-D-GFP细胞系;以GFP为报告蛋白研究ES细胞在胚胎中分化迁移的特性;建立绿色荧光蛋白嵌合体小鼠,为ES细胞途径介导的GFP转基
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目的 建立稳定表达绿色荧光蛋白的胚胎干细胞亚系ES-D<,3>-GFP细胞系;以GFP为报告蛋白研究ES细胞在胚胎中分化迁移的特性;建立绿色荧光蛋白嵌合体小鼠,为ES细胞途径介导的GFP转基因小鼠的制作构建技术平台;探讨GFP作为报告蛋白的有效性及安全性.结论1)成功建立了绿色荧光蛋白嵌合体小鼠,国内尚未见相关报道.2)成功建立了稳定表达绿色荧光蛋白的ES-D<,3>-GFP细胞系.3)GFP基因在小鼠体内能够有效表达,其安全性还有待探讨.4)单纯以毛色嵌合判断机体嵌合状态的方法存在一定的局限性,以GFP为指标更加全面而准确.5)外源ES细胞在该实验所得的嵌合体小鼠体中分布广泛,未见明显的部位倾向性.6)外源ES细胞在宿主胚胎中可聚集性生长,呈片状补丁样嵌合;也可单个细胞散在分布嵌合于宿主细胞间,后者提示了在组织中利用GFP对ES细胞实施单细胞追踪和实时观察的可行性,并对以往生殖系嵌合的检查方法提出质疑.7)ES细胞在宿主胚胎中仍具有内细胞团细胞的性质,尚无证据显示ES细胞具分化为胚外组织的能力.
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