论文部分内容阅读
目的：KLK1基因转染的BMSCs联合黄芪对急性心肌梗死大鼠的心肌梗死面积及炎性因子和血管内皮生长因子的影响 方法： 1、动物选择和随机化分组：健康成年SPF级Wistar大鼠雄性(体重180±20g)，随机抽取20只作为假手术组、正常组。其余采用结扎左冠脉法建立心梗模型，造模成功的70只大鼠按照随机数字表法进行分组，随机分为：模型组、阴性对照组、BMSCs组、BMSCs+KLK1组、BMSCs+黄芪组、BMSCs+5-Aza组、BMSCs+KLK1+黄芪组，共7组，每组10只。 2、干细胞准备：体外实验已确定病毒最佳感染复数（150MOI和最佳转染时间72h），本次实验调整细胞浓度为1×106BMSC/100μL用于体内细胞移植。 3、实验干预：大鼠造模后14d，再次开胸进行移植，用1ml注射器在心尖部分四点植入(1×106BMSCs/100μL，分4点注入)。阴性组在心尖部注射与干细胞等量的细胞培养基。黄芪组在造模后第三天腹腔注射黄芪注射液（0.3ml/100g），连续7d。无黄芪干预的注射等体积的生理盐水。 4、取材检测：?各组大鼠正常饲养四周后，检测心电图S-T段的变化。经腹主动脉取血（5-8ml），心脏组织取材。HE染色观察病理形态，免疫组化染色心脏组织检测 IL-6、IL-3、TNG-α、VEGF、PGI2、Capase3、Beclin。?血清ELISA检测相关细胞因子IL-6、IL-3、TNG-α、VEGF、PGI2。 结果： 1、干预措施对心肌梗死面积的影响：各实验组的梗死面积均小于模型组(P＜0.05)，其他干预组的梗死面积均小于阴性组(P＜0.05)，各干预组梗死面积大小排序为：阴性组>BMSCs组>BMSCs+黄芪组>BMSCs+KLK1+黄芪组>BMSCs+KLK1组>BMSCs+5-Aza组，BMSCs组与其他干预组比较梗死面积最大(P＜0.05)，BMSCs+5aza组与 BMSCs+KLK1组均小于其它干预组的心梗面积( P＜0.05)，二组之间无统计学意义(P＞0.05)。BMSCs+KLK1与BMSCs+KLK1+黄芪两组比较无统计学差异(P＞0.05)。 2、对细胞吞噬因子、细胞凋亡的影响： 干预后心肌组织中Beclin各组比较结果与Capase3相似，均发现与阴性对照组比较其他各干预组，均有统计学差异( P＜0.05)，表达水平排序均为：阴性组>BMSCs组>BMSCs+黄芪组>BMSCs+5-Aza组>BMSCs+ KLK1组>BMSCs+KLK1+黄芪组。与BMSCs组比较BMSCs+KLK1组和BMSCs+KLK1+黄芪组的Beclin表达水平较低(P＜0.05)，二组之间无统计学差异(P＞0.05)。与BMSCs+黄芪组比较BMSCs+KLK1组的表达水平低(P＜0.05)，BMSCs+KLK1组、BMSCs+KLK1+黄芪组、BMSCs+5-Aza组的Capase3表达水平均低于BMSCs组和BMSCs+黄芪组(P＜0.05),BMSCs+KLK1组、BMSCs+KLK1+黄芪组、BMSCs+5-Aza组的Beclin、Capase3表达水平比较无统计学差异(P＞0.05)。 3、对炎性因子、肿瘤坏死因子影响： (1)IL-6、IL-3和TNF-α在心肌组织中的表达水平均发现，模型组及阴性组高于其它干预组(P＜0.05)，模型组与阴性组间无差异(P＞0.05)。其中IL-3和IL-6均发现BMSCs+黄芪组与BMSCs组比较无统计学差异(P＞0.05)，且两组均高于BMSCs+KLK1组、BMSCs+5A-za组及BMSCs+KLK1+黄芪(P＜0.05)；BMSCs+5-Aza、BMSCs+KLK1和BMSCs+KLK1+黄芪三组间比较均无统计学差异( P＞0.05)。TNF-α表现为与BMSCs+KLK1+黄芪组比，BMSCs组、BMSCs+黄芪组和BMSCs+KLK1组均低(P＜0.05)；BMSCs+5-Aza组低于BMSCs+KLK1组(P＜0.05)；BMSCs+5-Aza组与 BMSCs+KLK1+黄芪组比较无统计学差异(P＞0.05)。BMSCs+KLK1与BMSCs+黄芪无统计学差异(P＞0.05)。 (2)IL-6、IL-3和TNF-α在血清的表达水平发现：IL-6血清检测，模型组高于干预组(P＜0.05)，阴性组低于BMSCs组(P＜0.05)，与其他干预组均无统计学差异(P＞0.05)，表达水平排序为：BMSCs组>BMSCs+5-Aza组>BMSCs+KLK1+黄芪组>BMSCs+KLK1组>BMSCs+黄芪组>阴性组，其中BMSCs组的表达水平高于BMSCs+黄芪组(P＜0.05)，其余各干预组之间均无统计学差异(P＞0.05)。 IL-3模型组、阴性组与BMSCs组比较无统计学差异(P＞0.05)，均低于与其余干预组(P＜0.05)，表达水平排序为：BMSCs+KLK1组>BMSCs+KLK1+黄芪组>BMSCs+黄芪组>BMSCs+5-Aza组>BMSCs组>阴性组。其中BMSCs+KLK1组和BMSCs+KLK1+黄芪组的表达水平比较无统计学差异(P＞0.05)，且两组表达均高于BMSCs+黄芪组、BMSCs+5-Aza组、BMSCs组(P＜0.05)，BMSCs组的表达低于BMSCs+黄芪组、BMSCs+5-Aza组(P＜0.05)。 TNF-α在血清血清检测发现：模型组、阴性组与BMSCs组比较无统计学差异（P＞0.05），均高于与其余干预组(P＜0.05)，表达水平排序为：阴性组>BMSCs组>BMSCs+5-Aza组>BMSCs+黄芪组>BMSCs+KLK1组>BMSCs+KLK1+黄芪组，其中BMSCs组和BMSCs+5-Aza组表达水平均高于BMSCs+KLK1+黄芪组(P＜0.05)，其余各干预组之间均无统计学差异(P＞0.05)。 4、对血管内皮生长因子、前列环素的影响： (1)VEGF、PGI2在心肌组织中的检测：VEGF的检测发现：模型组与阴性组均高于其余干预组(P＜0.05)，二组之间无统计学差异(P＞0.05)，表达水平排序为：阴性组>BMSCs组>BMSCs+黄芪组>BMSCs+5-Aza组>BMSCs+KLK1组>BMSCs+KLK1+黄芪组，其中仅BMSCs组的表达水平高于其他干预组(P＜0.05)，其余各干预组之间均无统计学差异(P＞0.05)。 PGI2的检测发现：模型组与阴性组均高于其余干预组(P＜0.05)，二组之间无统计学差异(P＞0.05)，表达水平排序为：阴性组>BMSCs组>BMSCs+黄芪组>BMSCs+5-Aza组>BMSCs+KLK1+黄芪组>BMSCs+KLK1组，BMSCs+KLK1+黄芪组和BMSCs+KLK1组的表达水平比较无统计学意义(P＞0.05)，且两组表达水平均低于BMSCs组、BMSCs+黄芪组、BMSCs+5-Aza组(P＜0.05)，BMSCs+KLK1组表达水平低于BMSCs+黄芪组、BMSCs+5-Aza组( P＜0.05)。 (2)VEGF、PGI2在血清中的检测：VEGF血清检测发现：模型组高于干预组(P＜0.05)，阴性组与其余干预组比较(P＜0.05)，表达水平排序为：BMSCs组>BMSCs+黄芪组>BMSCs+KLK1+黄芪组>BMSCs+5-Aza组>BMSCs+KLK1组>阴性组，BMSCs+5-Aza组和 BMSCs+KLK1组表达水平比较无统计学意义(P＞0.05)，且两组表达水平均低于BMSCs组、BMSCs+黄芪组、BMSCs+KLK1+黄芪组(P＜0.05)。BMSCs组表达水平高于BMSCs+KLK1+黄芪组(P＜0.05)。 PGI2血清检测发现：模型组和阴性组均与BMSCs+5-Aza组比较无统计学意义(P＞0.05)，与其余干预组均有统计学意义(P＜0.05)，表达水平排序为：BMSCs组>BMSCs+KLK1组>阴性组>BMSCs+5-Aza组>BMSCs+KLK1+黄芪组>BMSCs+黄芪组，其中BMSCs+KLK1+黄芪组和BMSCs+黄芪组的表达水平无统计学差异(P＞0.05)，且两组均低于BMSCs组、BMSCs+KLK1组、BMSCs+5-Aza组(P＜0.05)，BMSCs+KLK1组的表达水平高于BMSCs+5-Aza组(P＜0.05)。 结论：经KLK1基因转染的BMSCs联合黄芪对炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子、血管内皮生长因子、细胞吞噬因子、细胞凋亡因子抑制作用更突出；单纯的KLK1基因转染BMSCs对炎症因子IL-3、前列环素有促进表达作用，单纯的KLK1基因转染BMSCs在减少心肌梗死面积较显著。