Fas/APO-1基因转染人食管癌细胞及诱导其凋亡的研究

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细胞凋亡,又称程序性细胞死亡,是一种发生于胚胎发育,组织变态及转型过程中的生理性细胞死亡机制。近年来逐渐认识到,恶性肿瘤的发生及发展不仅是因细胞增生的失控引起,而且与细胞凋亡的减少有关。Fas/APO-1是一种细胞表面蛋白,当结合于特异性抗Fas抗体或它的生理存在的配体时,可诱导不同种类的细胞产生凋亡。对Fas/APO-1系统的进一步研究,不仅可以深入认识细胞凋亡的机制,也可以为恶性肿瘤的防治提供新的手段。实验内容如下: 1.应用免疫组织化学及RT-PCR方法,对32例人食管鳞状细胞癌及10例癌旁组织标本的Fas蛋白及Fas mRNA的表达分别进行了检测,结果显示:在32例食管癌组织中,免疫组化检测表达阳性表达率为43.8%(14/32),其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期阳性率分别为12.5%(1/8)、50%(5/10)及57.1%(8/14);癌旁正常组织染色均为阴性(0/10)。显示食管鳞状细胞癌中Fas/APO-1的表达同食管癌TNM分期即癌细胞的恶性程度存在着正相关的趋势。.RT-PCR检测结果与免疫组化接近。 2.我们在预实验中发现食管癌细胞系Eca-109对抗Fas抗体介导的细胞凋亡具有抵抗性。因此我们应用分子克隆技术将Fas cDNA插入至真核表达载体PBK-CMV的多克隆位点,通过脂质体介导法将构建的质
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