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研究目的： 探讨人脐带血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCB-MSCs)来源的外泌体-exosome对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的小鼠肝纤维化的修复作用，为临床hUCB-MSCs来源的exosome移植治疗肝纤维化提供理论基础和实验根据。 研究方法： 密度梯度离心法分离脐血单个核细胞(human umbilical cord blood mononuclear cells,hUCB-MNCs)，根据间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)贴壁生长的生物学特性，经过细胞换液及传代，将未贴壁细胞去除。分别通过形态学，细胞表面标志物鉴定贴壁细胞是否为正在分化的hUCB-MSCs。收集hUCB-MSCs无血清培养上清，超滤及蔗糖密度梯度离心法分离并纯化exosome。透射电镜下观察其形态，流式细胞术检测其表面标志的表达。腹腔注射CCl4构建小鼠肝纤维化模型。造模8周后，随机分为三组，分别经小鼠尾静脉注射hUCB-MSCs、exosome和生理盐水。4周以后，处死全部小鼠，分别采集小鼠血清和肝组织，检测肝功能AST、ALT和TBIL指标，并对小鼠肝脏进行 HE、Masson和天狼星红染色，观测其肝损伤和肝纤维化程度，综合评价hUCB-MSCs来源的exosome对小鼠肝脏纤维化的修复效果。 研究结果： 在体外成功的实现了hUCB-MSCs的培养与增殖。分离培养的细胞阳性表达CD166、CD44、CD105、CD29、CD73和 CD90，阴性表达 CD34、CD45，提示贴壁细胞为hUCB-MSCs。hUCB-MSCs分泌的exosome，透射电镜下均呈椭圆或碟状，直径介于40-100 nm之间，具有囊泡状结构。其表达共性标志CD63、CD81及MSCs表面黏附分子CD90、CD73、D105、CD29和CD166。与生理盐水组相比，hUCB-MSCs及其来源的exosome移植可降低肝纤维化小鼠体内AST、ALT和TBIL水平，差异有统计学意义(P<0.05)。病理染色显示肝脏胶原沉积减少，炎症症状减轻。 研究结论 1.密度梯度离心及贴壁培养法具有很强的操作性，可分离培养出hUCB-MSCs。hUCB-MSCs呈梭形的成纤维细胞样形态，具有MSCs的生物学特性，可作为实验所需要的种子细胞用于进一步的研究。 2.采用超滤及蔗糖密度梯度离心法可以成功从hUCB-MSCs培养上清中分离纯化出exosome。其分泌的exosome具有MSCs的膜蛋白抗原组分，提示exosome具有MSCs相似的作用。 3.Exosome移植对小鼠肝纤维化有缓解作用，可以改善小鼠肝损伤，这为hUCB-MSCs来源的exosome临床治疗肝纤维化提供实验基础，开拓了肝纤维化治疗的新思路和新方案。