研究背景：糖尿病神经病理性疼痛（diabetic neuropathic pain, DNP）的发病率很高，是糖尿病慢性并发症中最常见的一种，同时也是临床最常见的神经病理性疼痛（neuropathic pain,NPP）种类之一。其临床特征可表现为以下几种：自发性疼痛、诱发性疼痛、痛觉过敏、痛觉超敏以及异常性疼痛等。DNP患者肢体远端疼痛剧烈而持久，对标准的镇痛治疗效果不好。近年来相关研究报道证明：NPP的发生与补体异常激活密切相关，活化的补体蛋白在NPP模型动物的形成和发展中发挥重要作用，补体C3参与了NPP模型动物慢性疼痛的发生发展，且给予补体抑制剂抑制补体C3的表达后，可以逆转CCI模型大鼠的NPP症状。但是，NPP时补体异常激活的启动机制目前尚不清楚。正常情况下，机体内活化的补体可以被补体调节蛋白迅速灭活，并终止其级联反应，CRP的功能状况可以决定补体级联反应的强度，因此我们猜测，CRP具有成为NPP补体异常激活启动机制重要因素的基本条件。目前关于NPP的研究主要集中在外周神经损伤模型，如CCI模型、SNI模型以及SNL模型等，而DNP的发生是否也与补体的异常激活密切相关，同时CRP是否在其补体的异常激活过程中起到启动作用，目前尚无研究。目的：本实验拟应用不同剂量链脲佐菌素诱导DNP小鼠模型，通过观察小鼠DM模型成功率、发生NPP的比率以及28d生存率，选择制作DNP小鼠模型的最佳STZ剂量。同时观察DNP模型小鼠脊髓背角补体C3以及补体调节蛋白CD55的表达变化，寻找NPP发生发展过程中脊髓背角补体异常激活的“激发点”。方法：实验分三部分：1、探讨诱导DNP小鼠模型的最佳STZ剂量成年健康雄性C57BL/6J小鼠85只，体重18-20g，随机分为正常对照组（n=10）和5个不同剂量STZ实验组（n=15），观察STZ注射前及注射后3、7、14、21d小鼠血糖值变化；注射前及注射后3、7、14、21、28d小鼠机械痛阈值及热刺痛阈值变化以及小鼠的28d生存率。2、DNP小鼠脊髓背角补体C3mRNA及蛋白的表达成年健康雄性C57BL/6J小鼠90只，随机分为正常对照组（n=15）和制模组（DM，n=75），制模组小鼠根据不同时间点，又分为5个亚组：DM3、7、14、21、28d组，每组各15只小鼠。按照分组在STZ注射前以及STZ注射后规定的各时间点测定小鼠末梢血糖、机械痛阈值和热刺痛阈值。采用免疫组织化学染色法测定L4-6节段脊髓背角补体C3阳性细胞的情况；采用RT-PCR技术测定L4-6节段脊髓背角补体C3mRNA水平。3、DNP小鼠脊髓背角补体调节蛋白CD55mRNA及蛋白的表达实验分组以及采用的测量方法和技术均同第二部分。结果：1、腹腔注射STZ后DM小鼠模型制作成功的标准为：STZ注射后的3、7、14、21d检测小鼠末梢血糖值均>16.7mmol/L。DM小鼠与对照组小鼠比较，毛色暗淡粗糙，饮水量及尿量明显增多，体重减轻。发生NPP的小鼠其行为学检测出现了显著的疼痛行为学的变化：机械痛阈值和热刺痛阈值明显降低，与对照组和基础值比较均具有显著的统计学差异。A-E各组糖尿病成模率均>86.7%，C组NPP成模率（66.7%）高于其余各组，E组28d生存率最低（46.7%）。2、与对照组比较，DM组小鼠STZ注射后21d脊髓背角补体C3蛋白表达显著增加，补体C3阳性细胞数目增加；STZ注射后14d脊髓补体C3mRNA表达显著上调，与DNP小鼠出现NPP症状的时间相一致。3、与对照组比较，DM组小鼠STZ注射后7d脊髓背角补体调节蛋白CD55mRNA及蛋白表达都显著降低，并持续至STZ注射后28d，且有进行性降低趋势。结论：1、腹腔注射STZ诱导DNP模型最合适的注射剂量为120mg/kg体重，该剂量小鼠DNP模型成功率最高。2、DNP小鼠模型同外周神经损伤诱发的NPP模型相似，其NPP的发生和发展与补体的异常激活密切相关。3、补体调节蛋白CD55与DNP的发生发展有密切关系，脊髓背角CD55的表达下调先于模型小鼠出现NPP症状及脊髓背角补体C3表达增加发生，可能是NPP是补体异常激活的上游机制。