1988年Uyttenhove等[1]人在建立的Th2细胞株中发现白细胞介素9（Interleukin-9，IL-9），并将其命名为P40（即IL-9）。直到2008年Nature Immunology杂志上报道了关于“Th9”细胞能特异分泌IL-9、IL-10的一类新型辅助性T细胞，届时科学界对IL-9的研究又进入了一个新的高潮时期。据文献报道，IL-9主要与过敏性哮喘、寄生虫感染和过敏性脊髓炎等疾病有关。哮喘疾病导致IL-9大量表达，从而激活肥大细胞、嗜酸性粒细胞等增殖，进而导致气道炎症因子增多，分泌大量的粘液并伴随着高应答过敏反应[2]。在寄生虫感染中，IL-9主要参与免疫保护作用[3]。上述报道提示我们，通过制备IL-9单克隆抗体，采取人缘化修饰后在体内能有效地阻断IL-9的表达，进而对哮喘疾病的治疗起到一定的缓解作用，为下一步单克隆抗体药物的研发奠定了基础。本实验采用全基因合成的方式，根据大肠杆菌密码子的偏嗜性，对GeneBank中的IL-9成熟肽进行密码子替换后，送入上海捷瑞生物有限公司合成IL-9基因全序列，并克隆到PET-22b质粒中。以PET-22b-IL-9质粒为模板，通过PCR扩增，得到IL-9基因。将得到的目的基因与pGEX-6P-2质粒连接，转入XL-1Blue（E.coli）中，通过试验确定其最佳表达条件为：30℃，0.2mmol/L IPTG诱导5小时。破菌沉淀经SDS-PAGE电泳分析表明，目的蛋白在上清和包涵体中均有表达。经GST亲和层析纯化，获得了纯度较高的重组IL-9蛋白。将上述纯化的重组蛋白免疫BALB/C小鼠，获得效价为1:16×104的抗IL-9的小鼠血清，取小鼠脾细胞与SP2/0细胞在PEG1500的作用下进行细胞融合，融合率为42%。采用间接ELISA方法对杂交瘤细胞上清中分泌的单克隆抗体进行筛选，阳性率为3.6%。经过3次亚克隆筛选后，获得了1株能稳定分泌抗IL-9的杂交瘤细胞株，命名为2E5。采用秋水仙素鉴定杂交瘤细胞的染色体数目，结果显示该细胞株属于融合细胞体。通过分别与重组IL-9、标准IL-9蛋白和GST标签蛋白进行交叉反应来鉴定单抗的特异性，结果表明其有很高的特异性。反复冻融和传代的杂交瘤细胞分泌的上清经间接ELISA检测，其效价达1:320左右，小鼠腹水效价保持在1:12800。综上所述，此杂交瘤细胞的成功获得将会在抗体药物的研发中发挥重要作用。