【摘 要】
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家蚕(Bombyx mori Linnaeus)的蛹期在实际生产生活中,一般维持在两周左右,但是通过延长蛹期,可以节约大量花费在鲜茧加工过程中的人力物力。本文旨在利用Gal4/UAS酵母双杂交
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家蚕(Bombyx mori Linnaeus)的蛹期在实际生产生活中,一般维持在两周左右,但是通过延长蛹期,可以节约大量花费在鲜茧加工过程中的人力物力。本文旨在利用Gal4/UAS酵母双杂交系统,蛹期特异性表达启动子介导,控制东亚钳蝎毒素基因(BmKIT3R, Chinese scorpion Buthus martensii Karsch)特异性地在家蚕蛹期表达。Gal4蛋白由蛹期特异性表达启动子,家蚕翅原基细胞蛋白BmWCP4(B. mori wing-cuticle protein gene)或家蚕溶茧酶PDP (B. mori cocoonase gene)控制；BmKIT3R基因由可以被Gal4蛋白特异性识别的UAS (cis-acting element)序列控制表达,双元系统的激活系统和效应系统都装载在piggBac转座子载体上。piggyBac载体中含有由家蚕多角体病毒BmNPV ie-1(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus immediate-early gene)极早期基因启动子控制的新霉素抗性基因(neomycin-resistance gene, neo),以及家蚕A3(B. mori actin3)基因启动子控制的绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein gene, gfp)。载体被精子介导法导入家蚕受精卵,经绿色荧光蛋白观察和G418筛选,制得转基因家蚕。经传代后提取家蚕基因组,用PCR验证家蚕基因组中存在gfp与neo基因。双元系统杂交种的幼虫与对照组Gal4-和UAS-的种系相同,并无发育滞缓的情况,而在蛹期,前者因双元系统控制的BmKIT3R基因的表达,有些在蛹期死亡,有些蛹期发育迟缓,而对照组正常发育化蛾。并且,在Gal4/UAS双元系统中,BmWCP4的启动效果在试验中优于PDP的启动效果。双元系统杂交种UAS-BmKIT3R(3-247)×BmWCP4-Gal4(大造),UAS-BmKIT3R (3-247)×PDP-Gal4(3-166)和UAS-BmKIT3R (3-247)×PDP-Gal4(3-247)的蛹期延长效果较对照组而言,分别延长5天,2天和4天。从本文研究结果得出,Gal4/UAS介导的BmKIT3R基因在蛹期特异性表达阻滞蛹期发育,是延长家蚕蛹期的很好方法。
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