单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes Simplex Virus 1,HSV-1)属于疱疹病毒科α疱疹病毒,是一种具有复杂转录机制和基因组结构的DNA病毒,在世界范围内感染超过80%以上的人群。既往研究显示,该病毒感染宿主细胞后能重塑细胞基因表达,改变宿主基因和蛋白及其细胞代谢和抗病毒免疫等相关信号通路以促进病毒自身的复制。然而,HSV-1与感染细胞引起的转录组学变化及其潜在的生物学意义尚不清楚。本研究旨在运用深度测序技术检测HSV-1感染人成纤维细胞KMB-17后基因转录组表达特征,并筛选HSV-1感染后引起的差异表达基因和长链非编码RNA(lncRNA),对差异表达基因和lncRNA及相关信号通路进行生物学功能分析,为进一步研究HSV-1和细胞相互作用提供新的调控基因和lncRNA。转录组分析结果显示,相较于对照组细胞,HSV-1感染后有3885个蛋白编码基因发生显著性差异表达(2倍差异且FDR<0.05),包括3885个上调基因,1377个下调基因。对筛选的具有差异表达基因进一步进行GO和KEGG富集分析显示,那些差异表达基因主要富集在抗病毒相关的Jak-STAT信号通路、模式识别受体信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用通路等信号通路上。整合差异表达基因和功能富集分析,得到10个病毒感染应答调控的免疫相关基因,包括IL24、C2CD4A、CXCL5、CXCL2、CSF2、IL6、CCL20、CCL20、CSF3 和 ADCY8。差异 lncRNA 表达分析显示,HSV-1感染细胞后,共有891个lncRNA发生显著性差异表达,其中表达上调的有515个,表达下调的有376个。差异表达lncRNA靶基因的GO功能注释和KEGG代谢通路分析显示,lncRNA的靶基因主要被富集在Jak-STAT信号通路、模式识别受体信号通路上,提示差异表达lncRNA主要通过调控免疫相关基因来发挥抗病毒作用。全球每年约有5000万人感染登革热病毒(Dengue virus,DENV),导致数万人死亡。但是,目前临床上仍缺乏预防和治疗DENV感染的有效疫苗和药物。研究显示,中和抗体对DENV感染不仅具有预防作用,而且有治疗作用。基于临床上对DENV感染无有效防治手段的现状,我们提出:既然不能通过疫苗有效诱导针对四个型病毒的广谱中和抗体,可以通过腺相关病毒(AAV)递送抗体基因,直接给机体下达指令,生成针对四个型登革病毒的特异性广谱中和抗体的登革防治新策略。腺相关病毒(AAV)载体无致病性、低免疫原性、能转导分裂和非分裂的细胞并且可以稳定表达外源基因且毒副作用小等特点成为递送单克隆抗体强有力的技术手段。本研究旨在构建能够稳定表达有活性的抗登革病毒广谱中和抗体重组腺病毒系统,并测定和优化它们在体外表达的抗体生物学活性,评价重组腺病毒递送(表达)的广谱单克隆抗体基因表达情况。首先构建表达DV82.1质粒表达系统转染CHO细胞体外表达出DV82.1并验证抗体能否结合DENV,然后表达并构建能够稳定表达DV82.1的AAV表达系统,并在293细胞中验证DV82.1抗体基因表达效果。结果显示,pcDNA3.1-DV82.1能在293细胞中表达出DV82.1抗体重链和轻链,浓度达0.22ug/ul。ELISA结果显示,DV82.1抗体能特异性与登革病毒的4个血清型起免疫反应。进一步结果显示,构建的AAV-DV82.1表达系统在293细胞中过表达DV82.1抗体,过表达倍数达到4.9×105倍,表明已成功构建AAV-DV82.1递送系统,为下一步在小鼠体内评价AAV-DV82.1对登革感染的保护作用奠定了基础。