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金黄色葡萄球菌是一种重要的病原菌，能引起从轻微的皮肤感染到创口感染、脓毒血症等多种感染。随着抗生素的广泛使用，耐药菌不断出现并呈逐年上升趋势。在一些亚洲国家，90％以上的金黄色葡萄球菌为产青霉素酶菌株，70％-80％的金黄色葡萄球菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)，迫使万古霉素等糖肽类抗生素的使用增多，最终导致金葡菌株对糖肽类抗生素敏感性下降，甚至出现完全耐受万古霉素的菌株(VRSA)。因此，在合理使用现有抗菌药物、延缓耐药菌株产生的同时，还必须积极研制和开发新型的抗菌药物，应对已有耐药菌的治疗难题。 早在1877年，Pasteur和Joubert就系统记录了细菌间的竞争现象，他们发现不管在自然培养基或实验动物体内，大肠杆菌都能够影响与其混合培养的炭疽杆菌的生长，并预言了其潜在的医疗应用价值。接下来的三四十年间，广泛开展了用低毒性的细菌抑制潜在病原菌生长的研究。由于这些研究多属临床应用研究，并没有对抗菌物质进行分离和纯化，因而其中可能既有细菌素的作用又有抗生素的作用。1925年，Gratia最早描述了大肠杆菌分泌的抗菌物质——大肠菌素V，在高度稀释的条件下仍能抑制大肠杆菌Φ的生长。而大肠菌素V与后来发现的大多数大肠菌素完全不同，其正确的归属应为microcin。现已发现的大肠菌素超过25种之多，它们只能识别大肠杆菌近缘菌株外膜和内膜上的受体，因而四川大学硕士学位论文只杀伤大肠杆菌近缘菌株而不能识别其它细菌。大肠菌素按其作用方式可分为三类:形成离子通道使膜取极化(El族)、降解DNA(EZ族)或抑制蛋白质合成(E3族)。大肠菌素la属于可形成离子通道的El族大肠菌素，它的受体结合域和跨膜结构域能特异识别同种异株和近缘菌株外膜及内膜上的受体，再由通道结构域在其内膜上形成致死性离子通道，造成细菌内容物外泄而死亡。 1997年，Wiener报道了大肠菌素Ia的X光晶体结构，显示其通道形成域由10个卜螺旋构成。幻enker&Qiu等利用人工脂质膜系统，对大肠菌素Ia动态跨膜结构与功能的关系进行了研究，发现通道的形成分为两步:首先VIII一仄a-螺旋组成的疏水发夹结构循亲疏水效应插入脂质膜中;然后I和VI一切a-螺旋在跨膜电压差的驱动下插入膜内，形成电压依赖性离子通道，此时H一Va-螺旋的(约68个氨基酸残基长度)跨膜移动暴露于脂膜的tran:侧(相当于细胞内)。 最近二十年来，在基础微生物领域取得的重大进展之一是发现细菌细菌间通过分泌和感应特定的信号分子进行细胞间“通讯”，以判断环境中同类细菌数量，决定自身的生长、基因的表达以及毒力因子的产生的现象，称作“数量阂值感应(Quo~sensing)”。其信号因子(信息素)具有自主导向(autofnducing)并特异性识别同种细菌膜上受体的作用，又被称作“自主诱导因子(autoinduoer)”。Qiu等选择金黄色葡萄球菌的八肤信息素a盯Dl作为大肠菌素fa的“诱导物”，将其连接到大肠菌素Ia的梭基端上，产生融合蛋白pheromoniein一SA(Ph一SA)。该融合蛋白表现出了构成它的两个前体—金黄色葡萄球菌信息素和大肠菌素Ia各自都不具有的杀伤金黄色葡萄球菌的生物活性。前期研究己证实，Ph一SA对产青霉素霉金黄色葡萄球菌ATCC 29213及耐甲氧西林/本哇西林金黄色葡萄球菌显示出了极强的杀菌活性，本研究将在此基础上进一步定量四川大学硕士学位论文评价Ph一SA对多种细菌尤其是耐甲氧西林/本哇西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的体内外抗菌活性。 方法:体外部分采用琼脂二倍稀释法检测Ph一SA对多种革兰氏阳性菌和阴性菌的最小抑菌浓度(mi垃mal inhibito砂concentration，Mle);并重点比较Ph一SA与对照药物头抱哇琳、苯哇西林、万古霉素等对耐甲氧西林/苯哇西林金葡菌(MRSA)的抗菌活性大小(将试验所得MICS。按分子量差异进行校正)。体内部分选用K全江小鼠腹腔注射最小致死剂量(1 MLD)的金葡菌ATCC BAA一42(为MRSA菌株)，建立全身系统感染模型，1小时后经尾静脉注射给予不同剂量的Ph一SA及对照药物，观察8天内小鼠存活情况，绘制生存曲线图，比较不同药物高低剂量处理小鼠的8天存活率，以评价Ph一SA对MRSA感染小鼠的体内保护作用。体外部分结果: (1)对所试甲氧西林/苯哇西林敏感菌(MSSA)菌株的抗菌作用 非常显著，其MICS。值为o.sm岁L，抗菌活性分别强于万古霉 素48倍，头抱哇琳巧5倍，苯哇西林200倍; (2)Ph一SA对所试耐甲氧西林/苯哇西林金葡菌(MRSA)菌株的 抗菌作用也很强，其MICSO值为sm留L，抗菌活性分别强于 万古霉素12倍，苯哇西林3200倍，头抱哇琳622倍; (3)Ph一SA对所试甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE)菌株呈现 了较强的抗菌活性，MICS。值为lm留L，抗菌活性分别强于万 古霉素192倍，苯哇西林400倍，头抱哩琳巧5倍; (4) Ph一SA对所试耐甲氧西林/苯哩西林表皮葡萄球菌(MRSE) 菌株呈现了相对弱于对抗MSSE的抗菌活性，其MICS。值为 Zm留L，但抗菌活性仍然分别强于头抱哇琳72倍，苯哇西林 12800倍，万古霉素96倍;四川大学硕士学位论文 (5) Ph一SA对所试革兰氏阴性菌中大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、 鲍曼一不?