肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)是一种能够引起生物学效应的蛋白类物质,它是由辅助实质细胞完成器官功能的间质细胞分泌,能够与细胞表面的HGF受体特异性结合,诱导肝细胞生长因子受体(cellular-mesenchymal to epithelial transition factor,C-Met)自身空间构象发生变化,从而激活受体酪氨酸激酶,经过一系列信号传导、放大作用,最终激活多种与细胞增殖、迁移、侵袭等功能相关的信号通路。与此同时,该信号通路还受C-Met内吞作用、降解以及配体旁分泌递送等机制严格调控。尽管存在多种调控机制,但是在多种肿瘤细胞中出现了该信号通路的失调现象,该信号通路不断被HGF刺激活化,致使肿瘤细胞迅速增殖生长,胞间粘附作用减弱,促进细胞外基质水解,为肿瘤侵袭和迁移提供条件。因此通过药物阻断该信号通路的作用,将成为抗肿瘤治疗的有效手段之一。目前,国内外还未有针对该靶点的单克隆抗体药物上市,为了开发具有临床应用潜能的治疗药物,本课题展开了相关的研究工作,包括以下三个部分。第一,我们首先对两株单克隆抗体特性进行初步鉴定。利用紫外分光光度计对两株HGF抗体浓度进行检测,并通过SDS-PAGE及SEC-HPLC的方法对抗体的纯度、分子量进行鉴定。通过间接Elisa的方法对HGF抗体的结合能力进行检测,并探究其竞争性抑制C-Met与HGF结合的能力。结果显示,纯化后两株抗体均具有较高的浓度,浓度达到6 mg/mL以上。抗体的分子量与理论值预测值相符,且纯度达到98%以上,基本无杂质和多聚体等成分。两株抗体与HGF均具有较强的结合能力,能够竞争性的抑制受体与HGF的结合,具有较强的中和活性。第二,对两株单克隆抗体的体内外抗肿瘤活性进行研究,首先通过MTT法检测抗体抑制U87MG肿瘤细胞增殖的能力,通过Transwell法检测抗体对PC-3细胞迁移能力的影响实验,随后通过构建裸鼠人癌移植瘤模型,在小鼠体内评价两株HGF抗体的抗肿瘤活性。体外实验结果显示,两株抗体均能明显的抑制肿瘤细胞的生长,并且能够中和HGF促进肿瘤细胞迁移的作用。体内药效结果显示,两株抗体能够明显的抑制肿瘤组织生长,而HE19-12抗体则表现出了更强的抗肿瘤活性,肿瘤生长抑制率达到80%。第三,我们首先建立了Elisa检测小鼠血清中HGF抗体浓度的方法,并对该方法进行了初步方法学验证。通过小鼠药代动力学实验,探究两株抗体药物在小鼠体内的代谢情况,利用已建立的检测方法对不同时间点血清样本进行抗体浓度检测,计算两株抗体的药代动力学参数,评价两株抗体的药代性能。结果显示,我们成功建立了检测小鼠血清中HGF抗体浓度的间接Elisa方法,方法学验证结果显示,该方法具有较高的灵敏度、较强的稳定性及耐干扰能力。血药浓度检测结果显示,两株抗体在小鼠体内最大血药浓度相近,与HD19-27抗体相比,HE19-12抗体具有更长的体内半衰期和更高的药物暴露量,这与小鼠体内药效实验结果是一致的。本论文成功对两株人源化单克隆抗体进行初步鉴定及一系列抗肿瘤活性研究,证明该两株抗体是具有较强抗肿瘤活性的HGF中和抗体,且具有良好的药代动力学特征,为HGF/C-Met靶点抗肿瘤药物的开发奠定基础。