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在植物转录因子基因家族中,ERF是最大家族之一。大量研究表明ERF广泛参与了植物的逆境胁迫响应,包括冷热胁迫和低氧胁迫等。作为乙烯信号转导途径中最重要的元件,ERF在果蔬采后品质转录调控方面起着至关重要的作用。在植物的生长发育和逆境胁迫响应过程中,NAC转录因子参与转录调控,特别是冷热胁迫和低氧胁迫等,同时在采后贮藏过程中,NAC参与果蔬褐变过程中的转录调控。ERF和NAC转录调控功能一般通过结合下游结构基因实现。酶促褐变是莲藕褐变的主要原因,已有大量报道PAL,PPO和POD酶是鲜切果蔬酶促褐变的关键酶。PAL、PPO和POD基因是导致水果和蔬菜褐变的靶基因。在植物体内,低温贮藏、气调包装和真空包装大多属于一种不利的非生物逆境,但对于莲藕却是一种延缓褐变的有效技术手段。因此探讨ERF和NAC转录因子是否通过转录调控莲藕褐变目标基因参与其褐变进程是其分子机制研究的深入。本研究以鲜切莲藕为试材,采用生理生化方法研究不同的贮藏条件(低温、高浓度CO2气调和真空)对不同品种藕采后外观、褐变程度、总酚含量、PAL、POD和PPO酶活性的评价影响;利用生物信息学手段和QPCR技术等手段筛选介导鲜切莲藕褐变的关键PAL、PPO和POD基因;通过莲藕中差异表达的ERF、NAC基因的克隆及基因表达进一步筛选参与PAL、PPO和POD调控的ERF、NAC关键元件并分析其与褐变目的基因的相关性。初步鉴定介导莲藕采后褐变的关键ERF、NAC基因,为莲藕褐变转录调控机制研究提供基础。研究结果发现低温(4℃)、100%CO2MAP和真空贮藏明显延缓了莲藕褐变,且PAL、PPO及POD酶活性与褐变呈现正相关。这可能由于低温和低氧胁迫条件下褐变相关酶活性降低,从而抑制鲜切莲藕褐变。低温抑制NnPAL1,NnPPOA,NnPOD2-5表达;而在高浓度CO2MAP和真空贮藏条件下,NnPAL1,NnPPOA和NnPOD2/3表达均被抑制,与褐变进程相一致。因此NnPAL1,NnPPOA和NnPOD2/3可能是鲜切莲藕褐变的关键目标基因。利用RNA-seq和NCBI从莲藕中分离出7个NnERF和5个NnNAC,基因进化树分析发现NnERF和NnNAC与拟南芥基因家族不同成员存在一定同源性。低温抑制NnERF4/5和NnNAC1/2/3表达;而在高浓度CO2MAP和真空条件下,NnERF2/5和NnNAC1/3/4表达均被抑制,与褐变进程相一致。因此NnERF5和NnNAC1/3可能是鲜切莲藕褐变的关键转录调控因子。相关性分析发现,NnERF5和NnPAL1之间有显著相关性,NnNAC1和NnPPOA的相关性较高,而NnNAC3和NnPOD2显著相关,NnERF5可能通过调控NnPAL1,NnNAC1可能通过调控NnPPOA,而NnNAC3可能通过调控NnPOD2参与莲藕褐变,但其相互关系需要进一步验证。